用高效液相凝胶过滤色谱法测定伤寒Vi多糖和A群脑膜炎球菌多糖的分子大小

已经证明细胞荚膜多糖的免疫学性质与其分子大小直接相关。因此采用分子筛色谱测定分配系数（Kd值）及回收率（R％）在评估多糖菌苗的效力和稳定性方面是一个重要的依据。目前所采用的常规凝胶渗透色谱（GPC）测定Kd值及R％费时，且样品用量大。我们应用高效液相凝胶过滤色谱（     

b型流感嗜血杆菌多糖结合疫苗的研制

［摘 要］目的 研制b型流感嗜血杆菌（Hib）结合疫苗并考察其稳定性。方法 用溴化氰活化提纯Hib荚膜多糖抗原，通过己二酰肼（ADH）与破伤风类毒素（TT）蛋白共价结合，制备b型流感嗜血杆菌结合物，并考察放置在2～8℃及室温9个月和37℃　3个月后的稳定性。结果 用本工艺提取的多糖，合成的多糖衍生物，多糖蛋白结合物的化学组成及结构特性均达到了国外同类产品的质控要求。结合物在2～8℃及室温放置9个月后基本无降解。结论 为临床评价Hib结合疫苗的安全性和保护效果及确定效期提供了实验基础。     

细菌多糖疫苗苯酚污染的分析及其检测方法

目的　确定细菌多糖疫苗苯酚污染及其质量控制方法。方法　采用分光光度法 ,改良Lowry氏标准加入法和HPLC法。结果　正常的脑膜炎球菌多糖在 2 6 0nm波长附近有一个最大吸收峰λmax( 2 6 0nm) ,而苯酚的特征吸收波长为λmax( 2 70nm) ;5批正常的脑膜炎球菌多糖A2 60 /A2 70 值在 1 0 7～ 1 12之间。当正常多糖原液有苯酚污染时 ,最大吸收波长红移 ( 2 6 0nm 2 70nm) ,导致A2 60 /A2 70 值由大于 1变为小于 1。当苯酚增加到 2 0 μg/ml时 ,A2 60 /A2 70 降至 0 88,纯的苯酚为 0 6 2 ;采用内标加入法定量测定出伤寒Vi多糖残留苯酚含量为 0 10 1μg/ml;HPLC法定量测定 1型肺炎球菌多糖、Hib多糖和卡介菌多糖核酸样品中的苯酚含量分别为 0 2 8、0 96和 0 6 3μg/ml。 结论　①多糖原液的A2 60 /A2 70 值可判断多糖原液是否被苯酚污染。当A2 60 >A2 70 或A2 60 /A2 70 =1.1(或 >1.0 7)时为正常 ,无苯酚污染或苯酚污染可接受 ;当A2 60 =A2 70 或A2 60 /A2 70 =1时为介于正常和不正常之间 ;当A2 60 相似文献   

肺炎球菌荚膜多糖的稳定性

目的 了解２３个型的肺炎球菌荚膜多糖的稳定性。方法 分别用Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ２Ｂ或４Ｂ凝胶柱测定 相对分子质量及其分布（Ｋｄ）。结果 用蓝色葡聚糖２０００和氧化钠作标准测定外水体积Ｖｏ（１５２．５６或１５４．０４ｍｉｎ）和 内水体积Ｖｔ（４３２．２３或４４４．０７ｍｉｎ），均有良好的分离效果。于２～８℃保存的所有型别的多糖均符合规程要求，除１、 ２、４、８、１２Ｆ、１４、１８Ｃ和２３Ｆ型多糖因基础相对分子质量较大有轻微降解外，其他均未发现有明显降解；于室温保存的 多糖除１、２、８、１２Ｆ、１４和１８Ｃ型有轻微降解外，其他型多糖降解程度均较大；于３７℃保存的多糖除１、２、８、１２Ｆ和１４ 型有轻微降解外，其他型则有更大程度的降解。结论 高温不利于多糖的保存。２３个型别的液态多糖于２～８℃保 存１年均稳定。     

23价肺炎链球菌荚膜多糖疫苗的研制

目的　研制 2 3价肺炎链球菌荚膜多糖疫苗。方法　采用 1、2、3、4、5、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、2 0、2 2F、2 3F和 33F等 2 3型肺炎链球菌进行大罐培养和荚膜多糖的纯化 ,制备出 2 3价肺炎链球菌荚膜多糖疫苗。结果　经检定其主要质量指标均符合欧洲药典 (1997年版 )要求。结论　已建立起较为成熟的培养及纯化工艺 ,具备了规模化的生产条件     

用自动系统凯氏定氮仪测定生物制品中蛋白质含量

应用自动系统凯氏定氮仪测定人血白蛋白和人血丙种球蛋白的蛋白含量 ,重复性测定X % (n =10 )±SD分别为 2 0 45 %± 0 18%和 10 2 5 %± 0 12 % ;用硫酸铵、氨基乙酸和标准蛋白质控液作回收率试验R % (n =10 )±SD分别为 10 0 .2 4%± 0 5 7% ,99.89%± 0 43%和 10 0 5 0 %± 0 75 % ;用该法测定蛋白质含量与手工定氮法比较有良好相关性 ,总氮 (TN)相关系数r(n =2 6 )为 0 9999;非蛋白氮 (NPN)r(n =19)为 0 9946 ;蛋白氮 (PN)r(n =19)为 0 .9999。测定同批标准人血白蛋白 ,结果X % (n =2 0 )±SD为 5 5 3%± 0 14% ,与其参考标准值 5 5 4%± 0 12 %非常接近。因此 ,用该仪器法测定生物制品中的蛋白质含量准确可靠 ,且快速。     

一种测定生物制品中硫柳汞含量的新方法

用V2 O5 HNO3 H2 SO4催化消化冷原子吸收测汞仪测定法测定生物制品中硫柳汞含量具有测定结果精确 ,易重复 ,且简便 ,快速。用硫柳汞标准作标准曲线 ,线性回归方程为Y =1.2 796X - 6 .6 0 45ⅹ 10 - 4 ,相关系数r为 0 .9999。用该方法作 30批次样品内标回收率试验 ,平均回收率为 99.8%± 2 .8% ,变异系数CV为 2 .0 %。该方法是目前测定生物制品中硫柳汞含量较理想的方法 ,建议推广使用。     

6B型肺炎球菌荚膜多糖-破伤风类毒素结合疫苗的制备及其免疫原性

目的 制备6B型肺炎球菌荚膜多糖(6B-PNCPS)-破伤风类毒素蛋白(TT)结合疫苗,并研究其免疫原性。方法6B-PNCPS用溴化氰活化后与己二酰肼形成多糖-酰肼基衍生物,然后在蛋白活化剂碳二亚胺作用下将6B-PNCPS与TT进行共价结合。分别将其结合物及多糖免疫NIH小鼠,用ELISA检测小鼠血清中抗6B-PNCPS抗体。结果6B-PNCPS-TT结合物经凝胶色谱分析显示具有较6B-PNCPS更大的相对分子质量,多糖/蛋白比为1.42-1.66。结合物具有6B-PNCPS的血清学特异性,所诱生的抗6B-PNCPS特异性IgG抗体滴度与6B-PNCPS差异有显著意义。结论 用该法制备6B-PNCPS-TT结合疫苗,具有良好的免疫原性。     

卡介菌多糖核酸相对分子质量分布及其热稳定性

目的 测定卡介菌多糖核酸相对分子质量分布,并观察其热稳定性。方法 采用高效液相分子筛凝胶色谱法测定相对分子质量,并用煮沸或高压强热处理。结果 用该法测定卡介菌多糖核酸相对分子质量分布,有2个色谱峰,第1峰峰值相对分子质量为783 000,第 2峰为 3 200,面积分别为 21％和 79％。热处理后,其第 1峰相对分子质量大约有8％解聚合成第2峰。结论 卡介菌多糖核酸相对分子质量分布集中在3200,约占80％,对热较为稳定。     

肺炎球菌荚膜多糖的特性鉴定

目的 鉴定 ２３个型的肺炎球菌荚膜多糖并研究其特性。方法 按１９９７年版欧洲药典,对未作规 定的鉴定项目作了全面鉴定。结果９Ｖ和２０型的Ｏ－乙酰基含量,１１Ａ、１８Ｃ、２０和２３Ｆ型的糖醛酸含量以及７Ｆ型 的氨基己糖含量均较高,其他型及甲基戊糖含量则较低或未检出。用高压液相分子筛色谱检测各型多糖平均相对 分子质量显示出Ｋｄ值均较低。结论 对肺炎球菌荚膜多糖的特性进行了全面分析,并取得了完整的资料。