重组人骨形态发生蛋白-7工程菌的高密度发酵

目的建立重组人骨形态发生蛋白-7(rhBMP-7)工程菌的高密度发酵工艺。方法采用摇瓶及发酵罐培养工程菌BL21/pBV221-rhBMP-7,观察不同培养基、乙酸浓度、pH值、诱导时间等对工程菌菌体生长及目的蛋白表达的影响。在优化的发酵条件下培养工程菌,当菌体A600值达100时,42℃升温诱导,并对表达产物进行纯化。结果发酵培养基与LB培养基培养的工程菌目的蛋白的表达量无明显差异;乙酸可明显抑制菌体生长及目的蛋白表达;最适于菌体生长和目的蛋白表达的pH值分别为6.8和7.6;最佳诱导时间为3h。以优化的发酵条件培养的工程菌诱导3h后,目的蛋白的表达量可达菌体总蛋白的34.9%,最终菌体A600值可达139.5;经纯化的目的蛋白纯度可达95%以上。结论已初步建立了rhBMP-7工程菌的高密度发酵工艺。     

可溶性重组人成骨蛋白-1的制备

目的制备可溶性重组人成骨蛋白-1(rhOP-1),并尝试制备注射制剂。方法rhOP-1工程菌经发酵表达,收集菌体,提取包涵体,用SP-FF阳离子层析柱纯化。取纯度达95%以上的rhOP-1蛋白,透析复性,加入L-精氨酸作为复性助溶剂,制备成冻干粉末,以不加助溶剂的rhOP-1为对照。将制备的冻干粉末复溶后,观察rhOP-1溶解性,并检测其活性。结果复性液中加入L-精氨酸的复性rhOP-1蛋白浓度为0.5mg/ml,回收率可达60%,冻干粉末复溶后,溶解性及rhOP-1活性良好。结论用此复性方法制备的rhOP-1溶液作为注射剂,有较好的应用前景。     

南极磷虾对大鼠骨质疏松模型的影响

目的观察不同剂量南极磷虾粉及其与钙联合对骨质疏松模型大鼠的作用。方法将大鼠随机分为10组,即虾粉低、中、高剂量组、钙组、联合低、中、高剂量组、氟化钠组、假手术组、模型对照组,每组10只,通过切除双侧卵巢建立骨质疏松模型,假手术组仅切除卵巢附近部分脂肪组织。各实验组分别灌胃低、中、高剂量虾粉、钙、低、中、高剂量虾粉+钙、氟化钠,假手术组与模型对照组正常饮食。12周后,经腹动脉取血,分离血清,检测钙离子浓度及碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活性;取股骨观察骨密度及生物力学差异,并检测骨灰分含量;取胫骨检测骨氟含量。结果虾粉低、中、高剂量组及联合低、中、高剂量组大鼠血钙浓度随虾粉剂量的增加逐渐降低,虾粉高剂量组与模型对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),而联合低、中、高剂量组大鼠血钙浓度高于模型对照组;虾粉低、中、高剂量组ALP活性均高于模型对照组(P<0.05),且随着虾粉剂量的增加,ALP活性增强。联合低、中、高剂量组大鼠骨密度均高于模型对照组(P均<0.05),且优于低、中、高剂量虾粉组;与模型对照组相比,虾粉低剂量组及联合中、高剂量组均可明显增加骨最大力学载荷值(P均<0.05);与模型对照组相比,低、中、高剂量虾粉组随虾粉剂量增加骨氟含量增多,与钙联合应用后,降低了骨氟含量(P均<0.01),联合低、中、高剂量组与相同剂量的虾粉组相比,骨氟含量均降低;虾粉低、中、高剂量组与模型对照组相比,骨灰分含量升高(P均>0.05)。结论使用虾粉治疗骨质疏松时,低剂量效果最佳;若虾粉与钙联合治疗,中剂量虾粉加钙改善骨质疏松效果最佳。     

肽基精氨酸脱亚胺酶4抗体定性检测试剂盒的研制及初步应用

目的研制肽基精氨酸脱亚胺酶4(Peptidylarginine deiminase 4,PADI4)抗体定性检测ELISA试剂盒,并初步探讨其对诊断类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)的临床意义及应用价值。方法采用PADI4多肽片段作为包被抗原,制备PADI4抗体定性检测试剂盒,并检测50份RA患者和283份健康人血清,评价该试剂盒的分析性能、精密性和稳定性。使用该试剂盒对181份临床确诊RA患者和353份健康人的血清样本进行初步检测。结果所制备的PADI4抗体定性检测试剂盒总体符合率为85.3%,灵敏度为46.0%,特异性为92.2%;板内变异系数分别为2.47%和4.26%,板间变异系数分别为4.24%和6.20%;在4℃保存6个月,总体符合率、灵敏度、特异性、精密性均无明显变化,稳定性良好。181份RA患者血清中阳性检出率为45.3%,353份健康人血清中阳性检出率为7.7%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论所研制的试剂盒可用于类风湿关节炎的临床辅助诊断。     

南极磷虾氟在大鼠体内吸收代谢实验观察

目的研究南极磷虾氟在大鼠体内的吸收、分布情况。方法随机将大鼠分为8组,4组灌胃4 mL氟浓度均为0.3 mg/mL的氟化钠溶液、虾粉悬浮液、虾糜及煮沸的虾糜,在灌胃后15 min,30 min,1 h,2 h,4 h,8 h及24 h取血;另外3组连续7 d用同法给予氟化钠、虾粉、虾糜,最后一组正常喂养作为空白对照,分别取此4组大鼠的血液、肾脏、肺、心脏、肝脏和骨骼,用氟离子选择电极测氟浓度。结果大鼠连续食用南极磷虾后,肺、心脏及肝脏中氟含量无明显变化,但在血液及肾脏中均有升高,骨骼中升高尤为明显。结论大鼠连续一周大量食用南极磷虾会产生氟蓄积,蓄积的氟对机体特别是骨的影响有待进一步的研究。     

南极磷虾氟在大鼠体内吸收代谢实验观察

目的 研究南极磷虾氟在大鼠体内的吸收、分布情况.方法 随机将大鼠分为8组,4组灌胃4mL氟浓度均为0.3 mg/mL的氟化钠溶液、虾粉悬浮液、虾糜及煮沸的虾糜,在灌胃后15 min,30 min,1h,2h,4h,8h及24 h取血;另外3组连续7d用同法给予氟化钠、虾粉、虾糜,最后一组正常喂养作为空白对照,分别取此4组大鼠的血液、肾脏、肺、心脏、肝脏和骨骼,用氟离子选择电极测氟浓度.结果 大鼠连续食用南极磷虾后,肺、心脏及肝脏中氟含量无明显变化,但在血液及肾脏中均有升高,骨骼中升高尤为明显.结论 大鼠连续一周大量食用南极磷虾会产生氟蓄积,蓄积的氟对机体特别是骨的影响有待进一步的研究.