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目的原核表达、纯化嗜热β-葡萄糖苷酶,并检测其活性。方法从嗜热细菌Fervidobacterium pennivorans基因组DNA中PCR扩增β-葡萄糖苷酶基因,插入原核表达载体p ET-28a中,构建重组表达质粒,转化E.coli BL21(DE3)Codon Plus,筛选阳性重组菌,IPTG诱导表达。采用镍柱亲和层析法纯化重组酶;紫外吸收法检测酶活力和底物选择性。结果 PCR退火温度为67℃时,可扩增得到单一的目的基因条带;测序结果显示,重组表达质粒中目的基因的核苷酸序列与细菌基因组中该基因序列同源性为100%,未发现终止密码子及氨基酸的改变;表达的重组酶相对分子质量约为54 000;纯化的目的蛋白纯度达95%,浓度为10 mg/L;该重组酶能够高效催化对硝基苯-β-D-葡萄糖苷(p NPG)的水解,60℃条件下的比活力达124 293.5 U/mg。结论成功在E.coli中表达了嗜热细菌Fervidobacterium pennivorans来源的具有较高催化活力和底物专一性的β-葡萄糖苷酶。 相似文献
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进行了600 m跨径的高强混凝土(HSC)拱桥和活性粉末混凝土(RPC)拱桥的试设计,利用MIDAS软件建立空间有限元模型进行内力计算,依据公路圬工桥涵设计规范(JTG D61-2005)对RPC拱桥进行强度与稳定的验算。从拱圈截面刚度、内力与稳定和工程数量等方面,对这两种拱桥的受力性能和施工性能进行比较,分析RPC在超大跨径混凝土拱桥上应用的可行性,为我国拱桥向超大跨径发展提供参考。 更多还原 相似文献
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