精制胸腺活性肽药效学研究

目的 考察精制胸腺活性肽免疫学活性。方法 建立BALB/c小鼠肝细胞肿瘤(腹水型)模型,经腹腔连续注射肝肿瘤细胞15d,检测各种生命指标,以观察抗肿瘤效果。同时用E-玫瑰花环实验及淋巴细胞转化实验评价其生物学活性。结果 抗肿瘤实验表明,生命各项指标均优于盐水对照组,用药组10d、15d的存活率明显高于对照组;E-玫瑰花环及淋巴细胞转化实验均显示精制胸腺活性肽组明显高于对照组。结论 精制胸腺活性肽具有明显的免疫增强作用。     

胸腺肽纯化工艺的改进

目的 建立高效、快速、简便的纯化胸腺肽方法,以便提高胸腺素α1含量及活性,减少过敏反应。方法 采用 DEAE Sepharose FF、CM-Sephrose两种串联柱层析纯化。结果 纯化后的胸腺肽电泳结果出现明显的胸腺素α1带、玫瑰花结率可达33％(绝对值)以上,相对分子质量明显在3 100左右,无过敏反应。结论 建立了高效、规模化的胸腺肽纯化方法,提高了胸腺肽质量。     

干扰素脂质体的药代动力学和生物利用度

目的研究干扰素α2b脂质体药代动力学和生物利用度。方法采用旋转逆相蒸发法制备干扰素α2b脂质体。将小鼠分成2组,分别尾静脉注射干扰素α2b脂质体(L-IFN)和干扰素α2b(IFN),给药后分8个时间点采血,并取肝脏组织检测干扰素α2b含量。计算药代动力学参数和生物利用度。结果L-IFN组小鼠血液及肝脏组织中干扰素α2b消除速度低于IFN组,血中相对生物利用度为237·47%,肝脏中相对生物利用度为191·73%。结论干扰素α2b脂质体可明显提高小鼠的吸收和利用。     

重组戊型肝炎疫苗菌种库的建立及其稳定性

目的建立重组戊型肝炎疫苗工程菌三级种子库,并分析其稳定性。方法将工程菌株HEV179/BL21(DE3)复苏活化,经全面检测合格后冻干保存即为原始种子库;原始种子库传代扩增,经全面检定合格后,冻干保存即为主种子库;主种子库经传代扩增和全面检定合格后,甘油冻存即为工作种子库。对三级种子库进行全面检定,并对工程菌进行冻干及甘油冻存稳定性、甘油冻存时间稳定性及质粒稳定性检测。结果建立的三级种子库经全面检定合格;菌种冻干稳定性、甘油冻存稳定性、甘油冻存时间稳定性及质粒稳定性指标均合格,菌种生长特性、遗传和表达稳定性均未发生变化。结论成功建立了HEV179/BL21(DE3)工程菌三级种子库,菌种稳定性良好,适用于重组戊型肝炎疫苗的工业化生产。     

应用篮式生物反应器培养1A_5杂交瘤细胞及单克隆抗体分泌

目的 为了提高体外培养的杂交瘤细胞单克隆抗体的合成分泌,并为治疗型人源化单克隆抗体生 产摸索条件。方法 应用５Ｌ篮式及非篮式生物反应器培养１Ａ５杂交瘤细胞,以分泌干扰素单克隆抗体,从中对 １Ａ５细胞的接种浓度、反应动态、培养方式等进行研究。结果 细胞最适的接种浓度为２．０×１０５／ｍｌ左右;同非篮式 培养相比,在篮式培养过程中,通过葡萄糖消耗率的监测,及时地调节培养条件及换液时间,延长了培养周期,增加 了每罐收液批次,并且每次是全量换液,最高收液效价为１：４０９６。结论（１）１Ａ５ 细胞分泌干扰素单抗属于负生长 耦连型,葡萄糖消耗率与细胞的生长呈线性关系,可以利用糖消耗率的变化判断篮式生物反应器中细胞生长状况; （２）篮式生物反应器载体培养优于非篮式生物反应器悬浮培养;（３）适当地增加培养基中葡萄糖的量,可以提高干 扰素单抗的合成分泌。     

rhGM-CSF治疗急性再生障碍性贫血的效果

在常规治疗急性再生障碍性贫血 (AAA)基础上用大剂量的rhGM -CSF连续静脉给药 2w(5～ 15 μg kg.d)治疗 8例 ,并与常规治疗方法进行比较 ,研究结果表明 ,观察组较对照组外周血白细胞数增加 5～ 30倍。rhGM-CSF可以缓解AAA的临床症状 ,降低感染机会 ,是辅助治疗AAA的有效方法。     

Bcl-2、C-Raf及双靶点RNAi质粒对HCT-8细胞株增殖的抑制作用

目的研究Bcl-2、C-Raf及双靶点的RNA干扰质粒对人结肠癌HCT-8细胞株增殖的抑制作用。方法利用Ambion公司网上设计软件,分别以Bcl-2和C-Raf为靶标,设计合成63个核苷酸的双链RNA,构建质粒pSilencer3·1-H1/Bcl-2、pSilencer3·1-H1/C-Raf及pSilencer3·1-H1/Bcl-2/C-Raf,分别转染结肠癌细胞株HCT-8,用MTT法检测其对细胞增殖的抑制作用,RT-PCR检测Bcl-2和C-Raf的mRNA转录。结果经MTT法检测,构建的Bcl-2和C-Raf基因及双靶点RNAi质粒3个转染组的细胞存活率均降低,双靶点质粒转染组较两个单靶点转染组细胞存活率明显降低,差异有显著意义。经RT-PCR检测,转染双靶点质粒后,HCT-8细胞中Bcl-2和C-Raf基因的表达均较对照组明显减弱。结论Bcl-2、C-Raf及双靶点RNAi质粒对HCT-8细胞株增殖有抑制作用。     

纯化胸腺肽抗白色念珠菌的效果

目的观察纯化胸腺肽抗小鼠感染白色念珠菌的效果。方法选取昆明小鼠,建立白色念珠菌感染模型,感染浓度为0·5×106个/ml,实验分纯化胸腺肽组、胸腺肽组及空白对照组,实验组给药剂量为1·5mg/kg,对照组接种0·5ml生理盐水,感染前后10d,隔天肌肉注射,观察小鼠各项生命指标及抗感染效果。在最后一次注射后第8天,检测各组小鼠血清溶菌酶含量。结果纯化胸腺肽组各项生命指标均优于胸腺肽组及空白对照组,小鼠血清溶菌酶含量均显著高于空白对照组和胸腺肽组。结论纯化胸腺肽抗白色念珠菌感染的效果优于胸腺肽。     

冻干重组rhGM-CSF的稳定性

目的　观察冻干重组ｒｈＧＭ－ＣＳＦ的稳定性。方法采用ＸＴＴ法，ＴＦ－１细胞为依赖细胞株，对重组人 粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）进行了稳定性观察。结果重组ｒｈＧＭ－ＣＳＦ在３７℃保存３个月，２２℃５个 月，４℃４８个月生物学活性未降低。结论　重组ｒｈＧＭ－ＣＳＦ稳定性好。     

国产rhGM-CSFⅡ期临床疗效观察

目的　观察国产rhGM CSF对 5 5例肿瘤患者化疗所致WBE和ANE减少的防治作用及副反应。方法　采用多中心、单盲配对、自身交叉对照的方法。结果　rhGM CSF对肿瘤化疗所致的骨髓抑制、白细胞及粒细胞降低均有治疗及预防作用 ,副反应轻微 ,患者均可耐受。结论　rhGM CSF是肿瘤患者化疗后的一种有价值的辅助治疗药物