弓形虫P30蛋白抗原表位的克隆表达及纯化鉴定

目的构建表达P30蛋白抗原表位的重组质粒及工程菌,获得纯化的P30蛋白抗原表位,用于检测弓形虫特异性抗体。方法采用PCR技术,设计一对引物(P30P3、P30P4),从弓形虫基因组DNA中扩增出编码P30蛋白抗原表位的基因片段,与载体pET28a(+)连接,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后进行SDSPAGE分析。用离子交换纯化表达的P30抗原表位,用ELISA鉴定其抗原性。结果表达的P30蛋白抗原表位以包涵体形式存在,纯化的P30蛋白抗原表位片段有较好的抗原性,可用于检测弓形虫抗体。结论已成功构建了高表达P30蛋白的工程菌,为研制弓形虫抗体检测试剂或疫苗奠定了基础。     

人巨细胞病毒gp52蛋白基因片段的克隆及表达

目的为获得高表达人巨细胞病毒 ｇｐ５２蛋白基因的工程菌。方法通过计算机分析,筛选出巨细 胞病毒蛋白ｇｐ５２中优势抗原决定簇,用ＰＣＲ技术扩增克隆了含强抗原决定簇的基因片段。将克隆的基因片段插 入表达载体ｐＥＴ２８（ａ）内,转化大肠杆菌ＢＬ２１,经Ｓｅｐｈａｒｅｒｙ１ Ｓ－２００分子筛及Ｎｉ－ＮＴＡ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ螯合层析进行纯化。结 果获得的工程菌所表达的 ｇｐ５２蛋白片段相对分子质量约为 ２１ ０００,约占菌体可溶性蛋白的 ２８％。获得的表达蛋 白纯度达９５％,电泳显示单一条蛋白带,ＥＬＩＳＡ分析证实有较强的抗原性和较好的特异性。结论本研究对人巨细 胞病毒感染,尤其是对孕妇及献血员等感染的检测有重要意义。     

重组人巨细胞病毒gp52蛋白的纯化及鉴定

目的 对大肠杆菌表达的人巨细胞病毒ｇｐ５２蛋白纯化及鉴定。方法 将表达ｇｐ５２蛋白的菌体超 声裂解后,离心取上清,经ＤＥＡＬＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦ阴离子柱纯化,收集纯化的ｇｐ５２蛋白,再上Ｓ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　ＦＦ阳离子柱纯 化,收集纯化的ｇｐ５２蛋白,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测其纯度,用Ｗｅｓｔｅｍ　ｂｌｏｔ和 ＥＩＬＳＡ检测其抗原性。结果 纯化的ｇｐ５２蛋 白纯度达８５％以上,并有较好的抗原性和特异性。结论 制备的重组ｇｐ５２蛋白可用于人巨细胞病毒抗体的检测 等研究。