人丙酮酸羧化酶异位表达提高中国仓鼠卵巢细胞补料分批培养后期活率

构建了人丙酮酸羧化酶(hPC)异位表达的重组CHO细胞,并检测了重组细胞生长情况的改变。利用分子生物学实验技术构建hPC-pcDNA 3.0表达载体,将其转染CHO-K1细胞;转染细胞经过G418抗性筛选后,通过荧光定量PCR检测目的基因表达,并挑选表达量最高的克隆进行补料分批培养。电泳及测序结果显示,构建的hPC-pcDNA3.0表达载体序列与预期一致;在mRNA水平鉴定目的基因显示,4#克隆的mRNA表达水平最高;选其进行补料分批培养,生长曲线显示在培养后期,其活细胞密度和细胞活率均高于对照。成功构建了细胞生长和活率改善的重组CHO细胞,获得了生长改善的细胞株,为后续的重组蛋白表达研究与细胞培养工艺优化奠定了基础。     

hMDHⅡ过表达抑制过氧化氢压力下的CHO细胞凋亡

构建人苹果酸脱氢酶Ⅱ(hMDHⅡ)过表达的重组CHO细胞,并研究hMDHⅡ过表达对过氧化氢压力下CHO细胞凋亡的影响。结果显示,在0.1mmol·L-1过氧化氢压力下,hMDHⅡ过表达明显提高了补料分批培养后期细胞活率。线粒体膜电位及活性氧检测显示,hMDHⅡ过表达后线粒体膜电位显著提高、活性氧显著降低,表明hMDHⅡ过表达抑制细胞凋亡可能是通过减少细胞内活性氧而实现的。