黄芩苷对H2O2氧化损伤人黑素细胞的保护机制研究

目的:探讨黄芩苷对H2O2氧化损伤正常人黑素细胞的保护作用及其机制研究。方法:构建H2O2氧化损伤黑素细胞模型，通过观察不同浓度的黄芩苷处理H2O2氧化损伤正常人黑素细胞，采用倒置显微镜观察黄芩苷对黑素细胞形态的影响；cell counting kit-8（CCK-8）法检测黄芩苷对黑素细胞增殖活力作用；乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）法检测黄芩苷对黑素细胞LDH表达的影响, 并通过流式细胞仪检测活性氧（ROS）水平，荧光实时定量RT-PCR检测过氧化氢酶（catalase,CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶1（peroxidase 1,GPX1）mRNA表达情况，通过ELISA试剂盒检测黄芩苷和H2O2处理黑素细胞后分泌的热休克蛋白70（heat shock protein 70,HSP70）。结果:镜下观察黄芩苷给药后细胞较对照组形态明显改变，细胞数增多；黄芩苷作用黑素细胞后增殖率较对照组升高（P<0.05）；黄芩苷明显抑制黑素细胞中LDH表达，呈剂量-效应关系（P<0.05）。黄芩苷能显著促进CAT和GPX1 mRNA表达，且明显抑制HSP70分泌。结论:黄芩苷对H2O2氧化损伤的正常人黑素细胞具有明显保护作用，可为临床白癜风的治疗提供参考。     

用于黑素细胞培养和移植的壳聚糖/明胶复合交联膜的制备与表征

利用生物相容膜材料培养黑素细胞可用于白癜风移植治疗并提高移植成功率。本文通过物理交联方法制备了厚度约50微米的壳聚糖/明胶复合交联膜(CCGM),对CCGM的物理、机械性能及其用于黑素细胞的培养进行了研究。研究表明CCGM具有较高的吸水率和良好的水蒸气透过率,符合伤口敷料的要求。动态机械性能和拉伸实验结果显示该交联复合膜有良好的湿强度,能满足细胞培养、转移和移植的使用要求。此外,CCGM支持黑素细胞的生长和增殖,有望用于白癜风的移植治疗。     

用于黑素细胞培养的共聚改性壳聚糖交联膜的制备

生物相容性聚合物膜上培养黑素细胞可用于白癜风移植治疗。本文通过甲基丙烯酸酐酰化反应,在壳聚糖中引入双键。以2-羟基-4-(2-羟乙氧基)-2-甲基苯丙酮(I2959)为光引发剂,在365nm紫外光照下进行改性壳聚糖与三乙二醇二甲基丙烯酸酯和聚乙二醇甲基丙烯酸酯的交联共聚,制备改性壳聚糖交联膜(CMMC)。研究表明CMMC具有满足伤口辅料要求的吸水率和水分蒸发透过率,其机械强度优于硫酸钠物理交联的壳聚糖膜,黑素细胞能在CMMC上生长和增殖,并保持生物学活性,满足黑素细胞移植治疗的使用要求。     

黄芩苷对白癜风小鼠模型的作用机制研究

目的:探讨黄芩苷对莫诺苯宗诱导的白癜风小鼠模型发生发展的影响及其机制。方法: C57BL/6小鼠共40只分为4组,即阴性对照组、模型组、卤米松组及5%黄芩苷组,每组10只。应用40%莫诺苯宗乳膏诱导C57BL/6小鼠脱色,建立白癜风小鼠模型;进行5%黄芩苷对白癜风小鼠的疗效观察及其机制研究等;连续给药50 d,通过肉眼观察小鼠的毛发脱色,反射共聚焦显微镜(RCM)观察皮肤的黑色素和黑素细胞,免疫荧光检测CD+8T细胞。选取与白癜风相关的5个基因（CXCL9,CXCL10,CXCR3,RAB27A,PI3K）进行荧光实时定量PCR检测。结果: 模型组小鼠在用药部位及非用药部位有毛发脱色现象。卤米松组和5%黄芩苷组小鼠脱色减少,较模型组发生率明显降低、脱色出现时间明显延迟,脱色面积减小,且局部淋巴细胞和CD+8T细胞浸润较模型组明显减少。荧光实时定量PCR检测提示卤米松组和5%黄芩苷组CXCL9、CXCL10、CXCR3和RAB27A表达较模型组明显降低,而PI3K则升高明显。卤米松组和5%黄芩苷组之间无明显差异,但卤米松组用药30 d后,用药部位出现皮肤萎缩等不良反应。结论:卤米松组和5%黄芩苷组均具有治疗效果,黄芩苷组更安全有效,可为临床白癜风的治疗提供参考。