Ⅱ型B族链球菌表面免疫相关蛋白基因的克隆和原核表达

目的重组表达Ⅱ型B族链球菌表面免疫相关蛋白(Surfaceimmunogenicprotein,SIP)基因,为进一步免疫学研究提供目标蛋白。方法用PCR的方法从GBSⅡ型标准株的基因组DNA中扩增出SIP基因,用T/A克隆法将其插入pMD18T载体,构建原核表达载体pET32aSIP,用BL21(DE3)/pET系统表达TrixSIP融合蛋白,SDSPAGE和质谱分析鉴定表达产物,并对表达蛋白进行初步纯化。结果PCR扩增产物经测序,证实与GenBank中Ⅰa/c型GBS的SIP的基因序列同源性为99%。SDSPAGE显示,经IPTG诱导后BL21(DE3)/pET32aSIP总蛋白中出现一条相对分子质量为66000的新蛋白带。质谱分析和蛋白质库的比较证实其为B族链球菌表面免疫相关蛋白(SIP)的可能性分数为74。结论已成功表达并初步纯化SIP,为SIP在细菌致病中的作用研究以及相关疫苗的制备奠定了基础。     

我国矿山固体垃圾现状与利用潜力

文章分析了我国矿山固体垃圾对矿山环境、生态系统、国土建设造成的危害及其加剧程度,重点剖析了湖南柿竹园钨铋钼多金属矿、江西德兴铜矿、云南镇雄硫矿渣等典型矿山尾矿和矿渣的现状及资源潜力,系统地介绍了我国综合利用矿山资源和保护环境的主要政策措施,并针对我国典型矿山固体垃圾的综合利用和环境治理提出了对策建议。     

高纯石英制备技术评述

石英砂提纯是通过预处理、初提纯及精提纯等选矿工艺除去石英砂中少量或微量杂质以获得高纯石英砂,本文从煅烧水淬处理、磨矿、擦洗、磁选、浮选、浸出等石英砂提纯工艺方面进行评述,并指出了石英提纯应遵循的基本原则,这对制备高纯石英砂具有重要的意义。     

福建某铜矿石选矿试验研究

针对福建某硫化铜矿石,结合矿石性质与浮选工艺特点,进行了磨矿细度、调整剂、抑制剂、捕收剂种类以及用量等一系列条件试验,确定了最佳工艺参数范围。采用铜优先浮选、选铜尾矿再选硫的工艺流程,经过两次粗选、一次精选、四次扫选优先浮铜和一次粗选、两次精选、一次扫选选硫,获得了产率5.75%、铜品位22.43%、回收率90.62%的铜精矿和产率16.14%、硫品位51.04%、回收率68.95%的硫精矿,所得试验指标较为先进,可为该矿山开发提供有力的数据支撑。     

B族链球菌表面免疫原性蛋白的免疫原性及其抗体保护功能

目的制备B族链球菌(GBS)表面免疫原性蛋白(Sip),研究其免疫原性及抗体保护功能,为GBS蛋白疫苗研究奠定基础。方法采用基因重组技术构建表达载体,并表达GP-Sip融合蛋白。用pET-Sip融合蛋白免疫小鼠,并免疫家兔制备多克隆抗体。Western blot检测GP-Sip蛋白特异性,ELISA检测家兔及小鼠血清中特异性抗体水平,调理吞噬试验检测Sip抗血清的功能。结果表达载体经酶切和测序证明构建正确,GP-Sip蛋白在大肠杆菌中以可溶形式表达,纯化后纯度可达90%以上。Western blot显示GP-Sip蛋白可与pET-Sip蛋白的免疫血清发生免疫反应。ELISA显示Sip可诱发小鼠产生高水平的IgG抗体。Sip抗血清具有明显地促进吞噬细胞对GBS的吞噬作用。结论已成功构建GP-Sip表达载体,并高效表达了Sip。该蛋白具有良好的免疫原性,其抗体具有良好保护功能,可作为GBS蛋白疫苗成分或荚膜多糖疫苗载体成分。     

高纯石英制备技术评述

石英砂提纯是通过预处理,初提纯及精提纯等选矿工艺除去石英砂中少量或微量杂质以获得高纯石英砂,本文从煅烧水淬处理、磨矿、擦洗、磁选、浮选、浸出等石英砂提纯工艺方面进行评述,并指出了石英提纯应遵循的基本原则,这对制备高纯石英砂具有重要的意义。     

某金矿资源高效回收试验研究

某矿石中金的载体矿物为黄铁矿,针对该矿石,采用浮选工艺对其进行了回收金的试验研究。以Na2CO3作为矿浆pH值调整剂、以Y-89+戊基黄药作为捕收剂,采用一次粗选三次精选三次扫选的浮选工艺流程,闭路试验可获得金品位41.13g/t、金回收率85.45%的金精矿。工艺流程简单,回收指标较好,可作为高效回收金矿物的推荐工艺。     

某低品位矾矿选矿试验研究

浙江某低品位矾矿矿石性质复杂,嵌布粒度细,采用一次粗选三次精选两次扫选中矿依次返回的碱法浮选流程进行浮选试验,再将浮选得到的明矾石精矿经高梯度强磁选除铁,最终获得的明矾石精矿含Fe2O31.71％,SO3品位28.78％,SO3回收率82.23％.产品质量超过了明矾石特级品要求.     

B族链球菌C5a肽酶功能活性区域的分段表达

目的表达B族链球菌C5a肽酶蛋白功能活性区域,为进一步研究及开发疫苗奠定基础。方法设计引物,从GBSⅡ型标准株的基因组DNA中扩增出含有C5a肽酶蛋白不同功能区域基因的4个目的片段,分别插入T载体,再经酶切后,插入原核表达载体PET32a,进行融合表达。对表达蛋白进行免疫原性检测,并通过镍柱大量纯化。结果成功构建4个目的片段的PET表达质粒。经SDS-PAGE检测表达的融合蛋白相对分子质量分别为80000、78000、70000和36000。蛋白质谱分析证实,表达的4个蛋白为B族链球菌C5a肽酶蛋白的可能性分数分别为82、152、113和79。免疫印迹证实均能与特异性抗C5a肽酶蛋白的抗体反应,纯化后的蛋白SDS-PAGE纯度达90%。结论已成功地表达了可溶性C5a肽酶蛋白4个功能活性区域,为蛋白免疫表位和毒力机制的研究以及亚单位蛋白疫苗的制备奠定了基础。     

B族链球菌C5a肽酶表位的预测、分段表达及其免疫原性

目的应用生物信息学方法预测B族链球菌C5a肽酶蛋白(SCPB)的表位,分段表达其中4个功能活性区域,并分析其免疫原性。方法用预测程序ProPred和ANTIGENIC预测SCPB的表位;分别构建C5a肽酶4个目的片段的重组表达质粒,经酶切测序正确后,转化E. coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析目的蛋白的表达形式及表达量;并经镍柱亲和层析纯化,纯化的重组蛋白进行蛋白质谱分析和Western blot分析后,皮下免疫小鼠,ELISA检测小鼠血清抗体水平。结果经预测,SCPB含1个既可结合MHC又具有B细胞表位特征的肽段。构建的4个重组表达质粒经酶切及测序鉴定正确,目的蛋白主要以可溶性形式表达,表达量约占菌体总蛋白的30%～70%。纯化的重组蛋白纯度可达90%,质谱分析表明与SCPB的相似性很高;Western blot分析表明,可与兔抗全长SCPB多克隆抗体反应。重组F1、FE、Fn蛋白免疫小鼠血清抗体滴度较高,三者差异无统计学意义;F2a蛋白抗体滴度最低,与F1、FE和Fn蛋白差异有统计学意义。结论已成功构建并高效表达了SCPB的4个功能活性区域;Fn是重要的免疫优势表位功能区;本文为B族链球菌毒力机制的研究及亚单位蛋白疫苗的研制奠定了基础。