戊型肝炎病毒感染调控TLR3信号通路的研究

戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)是导致急性戊肝的主要原因.通过建立基因IV型HEV感染A549细胞模型,研究病毒感染后TLR3信号通路相关因子表达的变化.病毒感染A549细胞后通过实时荧光定量PCR检测IFN-β的mRNA表达量,Western blot分析磷酸化IRF3(pIRF3)和IKKε蛋白表达水平的变化.结果表明:HEV感染A549细胞后细胞内IFN-β的相对表达水平显著下降,TLR3信号通路介导的pIRF3及IKKε蛋白在病毒感染后表达量显著下降.基因Ⅳ型HEV能够抑制TLR3信号通路介导的IRF3的磷酸化及IKKε蛋白的表达,从而抑制了IFN-β的表达,为进一步研究HEV复制机制和致病机理奠定基础.     

天然免疫抗病毒因子RIG-Ⅰ过表达对HEV复制的抑制作用

视黄酸诱导基因I(retinoic acid inducible gene-I, RIG-I)在宿主天然免疫过程中具有抑制多种RNA病毒复制的作用.为了探究HEV感染过程中宿主天然免疫抗病毒因子RIG-I是否能够抑制HEV的复制,本文采用A549细胞及Huh7.5.1细胞接种HEV;瞬时转染RIG-I真核表达质粒;通过荧光显微镜、Real-time qPCR及Western-blot方法,分析细胞中RIG-I、IRF3和I型干扰素等细胞因子及HEV表达水平变化.结果显示细胞感染HEV后,RIG-I的表达水平显著上升;当细胞中RIG-I过表达时,可显著抑制HEV的复制;RIG-I可上调IRF3的表达,进而刺激I型干扰素的产生进行抗HEV作用.本研究明确了RIG-I过表达具有抑制HEV复制的作用,为今后进一步探究宿主天然免疫防御HEV感染提供了依据.