黑果腺肋花楸汁对便秘小鼠肠道功能的改善作用

为研究黑果腺肋花楸汁改善小鼠便秘,维护肠道健康的作用,将小鼠分为5组:空白对照组、便秘模型对照组、黑果腺肋花楸汁低、中、高剂量组,用样品干预14 d后通过盐酸洛哌丁胺造便秘模型,测定各组小鼠的排便功能、肠道运动、胃肠调节肽指标和16S rRNA肠道菌群指标。结果显示:便秘模型成立,黑果腺肋花楸汁可以缩短首粒黑便排出时间,增加5 h内排便粒数和质量,提高小肠墨汁推进率,促进胃泌素(Gas)、胃动素(MTL)和P物质(SP)含量,降低生长抑素(SS)、内皮素(ET-1)和血管活性肠肽(VIP)含量,且具有一定的剂量相关性。此外,黑果腺肋花楸汁在一定程度上可改变肠道菌群的分布,丰富物种的丰度,显著降低厚壁菌门与拟杆菌门相对丰度比值(F/B),降低便秘小鼠变形菌门、葡萄球菌属的丰度。研究表明黑果腺肋花楸汁对盐酸罗哌丁胺诱导的便秘小鼠有通便作用,其机制是通过调节肠道激素的分泌和肠道菌群结构来改善便秘症状。     

甲酯化方法对甘油三脂和游离型脂肪酸混合物的脂肪酸分析的影响

在重组解脂耶氏酵母催化红花籽油合成共轭亚油酸的过程中,大量的红花籽油与游离型亚油酸及共轭亚油酸以混合物的形式存在于发酵液上清。为了通过气相色谱准确分析催化过程中底物及产物的含量,确定甘油三脂和游离型脂肪酸混合物的最佳甲酯化方法至关重要。本文选择盐酸-甲醇法、盐酸-甲醇（甲苯）法、三氟化硼-甲醇法、氢氧化钠-甲醇法、酸碱综合法和重氮甲烷法6种方法,对红花籽油、游离型共轭亚油酸和二者混合物分别进行甲酯化,通过气相色谱定量分析,比较甲酯化效率。结果表明盐酸-甲醇（甲苯）法甲酯化程度高,且操作简便、安全、经济,是样品为甘油三酯和游离型脂肪酸混合物的最适甲酯化方法。     

重组解脂耶氏酵母全细胞催化合成反10,顺12-共轭亚油酸的条件优化

采用重组解脂耶氏酵母全细胞催化合成反10,顺12-共轭亚油酸(t10,c12-CLA)单体,为了提高t10,c12-CLA的产量,对全细胞催化条件进行优化。通过含有油酸的培养基摇瓶培养36 h获得菌体细胞,经反复冻融处理制备全细胞催化剂。优化后的催化体系条件为:温度28℃,磷酸盐缓冲液(p H 7)浓度0.1 mol/L,转速200 r/min,无需限制氧气。在优化后的反应条件下催化反应40 h,t10,c12-CLA产量达到15.6 g/L,转化率为62.2%。     

植物乳杆菌肌球交叉反应抗原MCRA的克隆表达及功能鉴定

根据NCBI中已报道亚油酸异构酶基因的序列特征从植物乳杆菌ZS2058克隆获得了产CLA的关键酶基因肌球交叉反应抗原MCRA,构建表达载体后,在大肠杆菌中实现了表达,SDS-PAGE和Westem Blot检测结果为胞内可溶表达,其大小约为67ku,将MCRA蛋白进行亲和层析后进行功能鉴定,GC-MS结果显示此蛋白能将亚油酸转化为羟基化衍生物10羟基-顺12-十八碳烯酸,将油酸转化为10-羟基-十八碳酸.     

His-tag对亚油酸异构酶在大肠杆菌中可溶性表达的影响

为了研究6×His-tag对来源于痤疮丙酸杆菌的亚油酸异构酶(PAI)可溶性重组表达的影响,我们构建了三种大肠杆菌重组菌株,表达了三种重组PAI:C端带有His-tag亲和标签、N端带有His-tag亲和标签和不加His-tag亲和标签。通过SDS-PAGE和Westernblot分析重组蛋白表达情况,并利用气相色谱检测酶活。实验结果表明:在相似的诱导表达条件及生长状态下,三种大肠杆菌重组菌株均成功表达了具有亚油酸异构酶活性的重组蛋白质,三种重组PAI的表达总量相当,6×His-tag的融合表达促进了PAI蛋白质包涵体的形成,而C端6×His-tag带来的影响最大。     

红枣枸杞浸泡酒对小鼠润肠通便功能的研究

该实验通过对小鼠进行通便功能实验,研究了红枣枸杞浸泡酒的润肠通便作用。将小鼠随机分为7组,采用洛哌丁胺灌胃建立小鼠便秘模型,通过测定小肠推进率、首次排黑便时间、排黑便粒数以及排黑便质量,判断红枣枸杞浸泡酒对小鼠小肠运动和排便功能的影响。结果表明,该红枣枸杞浸泡酒的高剂量组（10.0 mL/kg体质量）可提高小肠墨汁推进率;低剂量组（2.5 mL/kg体质量）可缩短首粒黑便排出时间,低、高剂量组可增加5 h内排便粒数,高剂量组5 h内可增加排便质量。蒸馏酒组的四项实验结果与模型组相比均无显著性差异,结合红枣枸杞浸泡酒中功效成分分析,与蒸馏酒相比较,总黄酮、总酚及总糖含量均较高,进一步推测该浸泡酒的通便效果来自于浸泡过程中的功效成分。     

解脂耶氏酵母β氧化基因敲除菌的构建及挥发性脂肪酸的利用

为了抑制解脂耶氏酵母长链脂肪酸的β氧化,使其稳定地积累,通过基因调控途径构建了4株脂肪酸β氧化基因敲除菌株,并研究了重组菌株利用挥发性脂肪酸作为碳源合成长链脂肪酸的能力。结果表明:分别敲除pox2、pox3和pex10的3株单基因敲除菌株及同时敲除pox2和pox3的组合基因敲除菌株构建成功,4株重组菌株均可以利用挥发性脂肪酸进行生长。与原始菌株相比,polf-Δpox2Δpox3和polf-Δpex10总脂产量(长链脂肪酸总和)在发酵后期并未因脂肪酸的β氧化而出现明显下降,是可以利用挥发性脂肪酸且可实现脂质积累的重组菌株。     

重组融合蛋白MBP-PAI的表达、纯化及酶活测定

为了解决亚油酸异构酶(Linoleic Acid Isomerase,PAI)在大肠杆菌中形成包涵体的问题,选择麦芽糖结合蛋白(Maltose-Binding Protein,MBP)标签和低温诱导表达系统pColdV,构建了大肠杆菌重组表达菌株E.coli BL21(pCold-Mpai),并对其诱导表达条件进行了优化。SDS-PAGE电泳结果显示,融合蛋白MBP-PAI成功表达,重组菌的最佳诱导表达条件为:诱导温度15℃、IPTG添加量0.1 mmol/L、诱导时间12 h,在该诱导条件下,与未融合MBP的PAI相比,MBP-PAI的可溶性表达量为后者的18倍、酶活为后者的1.5倍。经过MBPTrap HP亲和层析柱纯化后,MBP-PAI纯蛋白质的比酶活为1.58 U/mg,能够转化亚油酸形成反10,顺12-共轭亚油酸。     

基于高通量测序分析红枣枸杞浸泡酒对小鼠肠道菌群的影响

该研究基于高通量测序手段探究了红枣枸杞浸泡酒对小鼠肠道菌群的影响.实验中,40只c57/6 J雄性小鼠随机分为4组,即蒸馏酒对照组(10.0 mL/kg BW)、低聚果糖对照组(低聚糖1.0 g/kg BW)、红枣枸杞浸泡酒低(10.0 mL/kg BW)、高(20.0 mL/kg BW)2个剂量组.连续灌胃14 d后...     

不同培养基对耶氏解脂酵母合成共轭亚油酸的影响

为了提高共轭亚油酸(CLA)在耶氏解脂酵母重组菌株中的产量,选择YEA、YPD、YP2D4、YNBDO2和YNBDL25种培养基,对其进行摇瓶发酵,分析其生长状态,并利用气相色谱法测定菌体中的总脂含量及脂肪酸组成.结果表明:培养基中充足的碳源和氮源是提高菌体生物量及重组蛋白表达量的前提;在培养基中添加脂肪酸显著提高了菌体中的总脂含量和t10,c12-CLA产量;在5种培养基中,YNBDL2是最适合t10,c12-CLA合成的培养基,其培养基中t10,c12-CLA产量为185.8 mg/L,是YPD培养基中t10,c12-CLA产量的13倍.