高效液相色谱-串联质谱法检测副溶血弧菌生物被膜形成过程中的N-酰基高丝氨酸内酯信号分子

N-酰基高丝氨酸内酯(AHLs)是副溶血弧菌的群体感应系统的信号分子,参与微生物的毒力调控,目前缺乏准确检测生物被膜中的信号分子的方法。在现有信号分子HPLC-MS/MS检测条件基础上,针对副溶血弧菌生物被膜生成过程中信号分子定性定量检测方法进行优化。结果显示:无水甲醇:0.1%乙酸铵水为流动相分离效果较优;当选择碰撞能量为10~15 eV时,各信号分子均可形成较高比例的特征碎片离子(m/z)102.1和74.1,并在0~20 μg/L范围内均有良好的线性关系(R2>0.995),采用该法能够检测副溶血性弧菌生物被膜形成过程中产生的C₄-HSL、3-oxo-C₆-HSL和3-oxo-C₁₄-HSL三种信号分子,其中C₄-HSL的量占绝对优势(>91.67%)。在生物被膜形成的前期(0.5~3 d),信号分子的浓度缓慢增长,与生物被膜的生成量成正相关;当被膜进入消散期时(4~5 d),信号分子的浓度快速增长,与被膜生成量呈显著负相关。高效液相色谱-串联质谱法的优化有助于更加有效地检出生物被膜中的信号分子,为更好地认识生物被膜与群体感应信号分子间的调控关系提供支撑。     

4-羟基-2,5-二甲基-3(2H)呋喃酮对单增李斯特菌AI-2类群体感应的干扰效应

利用群体感应抑制剂靶向干扰病源菌已成为有效控制致病性危害的突破口。本研究通过测定菌体浓度、哈氏弧菌BB170报告菌的发光值,研究不同浓度4-羟基-2,5-二甲基-3(2H)呋喃酮(DMHF)作用下单增李斯特菌(L.m)的生长与信号分子AI-2活性;通过半固体穿刺法、结晶紫法及溶血平板法检测L.m的动力、生物膜及溶血性,来评价DMHF对L.m AI-2类QS的干扰效应。结果表明,≤ 200 μg/mL的DMHF能推迟L.m的生长,且明显抑制了L.m AI-2的活性,实验组的AI-2活性值均低于阴性对照组的40%,由此可判定DMHF是AI-2类QS的抑制剂;当DMHF浓度为100 μg/mL时能明显抑制L.m的运动能力;50、100和200 μg/mL的DMHF对L.m生物膜的形成抑制率分别为29.72%、44.88%和75.27%;200 μg/mL的DMHF完全抑制溶血环的产生,本研究为利用DMHF作AI-2类QS的抑制剂提供依据。     

一株拮抗海鱼干优势耐盐真菌芽孢杆菌HY-5筛选及其抗菌成分鉴定

目的:开发新的海鱼干耐高盐优势真菌抑制剂。方法:取用湛江市特呈岛红树林海域的海水、海泥以及红树林的根、茎和叶的样本,利用琼脂扩散法和平板点种法筛选出一株强抗菌活性菌株HY-5,通过传统细胞形态观察并结合生理生化实验及16S rDNA序列进行分析鉴定;利用杯碟法测定上清液对17株霉变海鱼干优势真菌抗菌谱,发酵液酸沉后经LC-MS检测其抗菌成分。结果:HY-5被鉴定为解淀粉芽孢杆菌,其上清液对17株霉变海鱼干优势真菌均有明显抗菌作用;LC-MS检测到HY-5发酵液中含2组抗菌脂肽surfactin(994.6、1008.6、1022.5和1036.6)和iturin(1016.5、1030.5、1044.4和1058.3)组分。结论:海洋源解淀粉芽孢杆菌HY-5的粗提液中含有抗菌脂肽,其对霉变海鱼干优势真菌有较强的拮抗作用。     

海洋源降解核苷乳酸菌的体外筛选、鉴定及其益生特性研究

乳酸菌具有降解肠道中核苷的能力,已成为预防或辅助治疗高尿酸血症的有效方法。以肌苷、鸟苷、腺苷作为降解底物,采用HPLC法从海洋动物肠道中筛选降解核苷乳酸菌,并对降解菌株的益生特性进行研究。结果表明,在分离到的30株菌株中,菌株BX-59与2Y-15对3种核苷的降解能力最强,经鉴定为发酵粘液乳杆菌(Limosilactobacillus fermentum)。其特性实验表明,2株发酵粘液乳杆菌不具有溶血性,对抗生素无耐药性,同时对DPPH与·OH的清除率分别为61.05%、58.36%与57.84%、61.12%。2株菌在人工胃液与肠液中的存活率分别为98.7%、99.8%与80.0%、64.0%。菌株BX-59在人工饱腹肠液环境状态下,对肌苷、鸟苷、腺苷降解率为60.78%、51.34%、59.00%,而菌株2Y-15在人工饱腹肠液环境状态下,对肌苷、腺苷的降解率为100%,对鸟苷的降解率为98.60%。该研究为2株菌作为防治高尿酸血症微生态菌剂的开发与应用提供依据。     

四种药用植物提取物抑菌保鲜活性的研究

应用滤纸片扩散法、微量稀释法等方法研究银杏叶、当归、党参(野生)、藏茵陈4种药用植物水和乙醇提取物抑菌效果以及在食品保鲜方面的应用。结果表明水提取物均无明显的抑菌活性;银杏叶、藏茵陈醇提取物对金黄色葡萄球菌有抑菌活性,对大肠杆菌、酿酒酵母无明显抑菌效果,对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度分别为450、160μg/mL。发现随着基质pH的改变,2种提取物的最低抑菌浓度随pH的增加而升高,但变化趋势较常用防腐剂山梨酸钾和苯甲酸弱,在pH5～8的范围,2种提取物的最低抑菌浓度均低于山梨酸钾。在模式食品中将提取物与山梨酸钾、苯甲酸进行联合添加具有协同增效抑菌活性,可降低化学防腐剂的用量,尤其是与苯甲酸联合添加,可在一周内完全抑制金黄色葡萄球菌的生长。     

基于肠道微生物解析红鱼干中黄曲霉B1和T-2毒素对小鼠的毒效应差异

为探明霉变红鱼干中黄曲霉B1(AFB1)和T-2毒素(T-2)污染的潜在危害与肠道微生物的关联性,采用灌胃法对小鼠染毒,采用Illumina-MiSeq高通量测序技术分析微生物群落结构和组成变化,采用血液分析仪测定小鼠红细胞与白细胞数量以及血红蛋白浓度,采用酶标法测定小鼠2种肝功能酶活(谷草转氨酶、谷丙转氨酶),并分析肠道菌群变化与这些潜在危害的关联性。结果表明,AFB1能显著提高拟杆菌门的普雷沃氏菌科、鼠杆菌科、厚壁菌门的梭菌科的相对丰度,降低厚壁菌门的乳杆菌科与变形菌门的产碱杆菌科的相对丰度;而T-2显著增加厚壁菌门的乳杆菌科丰度,显著降低鼠杆菌科、产碱杆菌科丰度,这些菌群的丰度变化均被证实与肝炎、血液与免疫疾病相关联。AFB1毒素组显著降低小鼠白细胞数量(P0.05),而红细胞数量与血红蛋白变化不显著(P0.05),说明AFB1具有免疫毒性;T-2引起小鼠3项血液指标全部显著降低(P0.05),说明T-2具有较强的免疫毒性与血液毒性。AFB1毒素组的小鼠肝脏内谷草转氨酶(AST)/谷丙转氨酶(ALT)的比值大于1,表现明显的肝炎症状;而T-2毒素组小鼠肝脏的AST/ALT比值小于1,肝损伤不明显。红鱼干中AFB1和T-2毒素引起肠道菌群丰度变化与其表现出的肝炎、血液毒性与免疫毒性相关,说明鱼干中AFB1与T-2残留危害还可能与诱变肠道微生物有关。     

贻贝、牡蛎复合物对肠道菌群紊乱型小鼠便秘的干预作用

本研究探讨了贻贝、牡蛎复合物对抗生素诱导小鼠便秘的干预作用,采用混合抗生素溶液灌胃C57BL/6雌性小鼠,构建肠道菌群紊乱型小鼠便秘模型（ME）,以0.02 mL/g?bw贻贝、牡蛎复合物灌胃ME组小鼠为干预组（IC）。结合16s RNA基因测序技术,7 d后,测定小肠推进率、排便量、饲料消耗量、肠道菌群结构等指标,评估小鼠便秘模型及其贻贝、牡蛎复合物的干预作用。对比空白组,ME组小肠推进率下降22.89%（p<0.05）,排便量降低41.00%（p<0.05）,日平均饲料消耗量显著下降2.68 g/d（p<0.05）,粪便含水率显著下降19.40%（p<0.05）,同时,ME组肠道菌群有益菌多样性减少,表现为Prevotella-9、Lachnospiraceae、Enterobacter、Verrucomicrobia等有益菌菌群丰度降低;经贻贝、牡蛎复合物干预后,对比ME组,IC组小鼠小肠推进率提升70.00%（p<0.05）,排便量提升52.00%（p<0.05）,粪便含水率显著增加18.10%（p<0.05）,IC组肠道菌群多样性增加,表现为Proteobacteria、Fusobacteria、Akkermansia、Bacteroidetes、Verrucomicrobia丰度增加,同时IC组肠道菌群结构恢复至与空白组小鼠相似。综上,贻贝、牡蛎复合物可显著改善由抗生素导致的便秘小鼠的小肠推进率等小肠蠕动功能,增加小鼠排便,并提高粪便含水率,同时调节便秘小鼠的肠道菌群结构及组成,增加Akkermansia等肠道有益菌。     

南美白对虾感染真菌毒素后的微生物菌相变化

为探明在养殖过程中受T-2毒素、黄曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A和呕吐毒素污染的南美白对虾,经贮藏后微生物菌相结构变化的特征,采用食品安全国家标准(GB 47892-2010)对菌落总数测定的方法,计算染毒对虾中的菌落总数,同时从染毒的南美白对虾中分离筛选和鉴定出不同属的微生物,并与未染毒对虾中的微生物数量、种类及其变化趋势进行比较。实验结果表明:染毒对虾肌肉微生物种类在贮存第1~8 d和第16~20 d间,菌落种类保持在2~4种和4~7种,菌群总数呈先下降后上升再下降的趋势。从未染毒对虾和染毒对虾样品中共分离出7株菌,经16S rDNA进行测序,分别鉴定为考克氏菌属、金黄杆菌属、希瓦氏菌属、弯曲芽孢杆菌属、假单胞菌属、细杆菌属和微小杆菌属,每株样品菌种匹配率均在97%以上,其中对水产品的腐败能力较强的金黄杆菌属、希瓦氏菌属和假单胞菌属在染毒对虾中检出,空白组只检出希瓦氏菌属。真菌毒素使对虾肌肉产生变化,导致对虾肌肉品质下降,从而形成适合腐败能力强细菌的生长环境,产生新的菌种。     

基于模糊数学评价法优化低钠盐腌制即食红鱼片工艺

探究腌制料配比和加工工艺对即食红鱼片品质的影响,研发一种低钠盐腌制的即食红鱼片产品。以红鱼作为研究对象,模糊数学感官评价法为主要考察指标,利用质构、色差等技术,研究低钠盐腌制工艺和烘干油炸工艺对即食红鱼片品质的影响。确定的最佳腌制料配比：低钠盐6 g/100 g、白砂糖5 g/100 g、生抽3.0 g/100 g、料酒150 g/100 g、白醋2.0 g/100 g、碳酸氢钠0.6 g/100 g、辣椒面9 g/100 g,最佳的加工条件：烘干温度50 ℃、烘干时间3 h、油炸温度160 ℃、油炸时间3.0 min。该配方下得到的低钠盐腌制即食红鱼片色泽金黄,有嚼劲,咸淡适中。     

不同方法提取红鳍笛鲷鱼鳞胶原蛋白的结构和理化特性研究

为探明不同提取方法对红鳍笛鲷(Lutjanus erythropterus)鱼鳞胶原蛋白理化特性的影响,以红鳍笛鲷为原料,分别提取酸溶性胶原蛋白(acid soluble collagen, ASC)、酶溶性胶原蛋白(pepsin soluble collagen, PSC)及热水溶性胶原蛋白(hot water soluble collagen, HSC),对比分析3种胶原蛋白提取率、得率及纯度的差异,并测定其氨基酸组成、分子质量、二级结构、Zeta电位、溶解性以及微观结构等理化特性。结果表明,热水法提取率最高,为45.25%,其次为胃蛋白酶法;HSC、ASC、PSC的亚氨酸含量分别为18.28%、17.54%和18.30%。HSC、ASC和PSC均为I型胶原蛋白,包含两条α链(α1和α2),ASC比PSC的β链含量高,HSC、PSC的γ带消失;ASC、PSC具有相似的红外光谱,且保留了完整的三螺旋结构,HSC的三螺旋结构被破坏;HSC、ASC、PSC的净电荷零点为5～6;ASC、PSC在pH 5～11中溶解度较低;扫描电镜显示,ASC呈无序纤维状结构,PSC呈致密多孔网状结构,HS...