桑椹总RNA抽提方法的比较

为对比CTAB改良法、E.Z.N.A.TM总RNA抽提试剂盒Ⅱ、EZ-10柱式总RNA抽提试剂盒和异硫氰酸胍法4种方法抽提桑椹总RNA的效果,对该4种方法抽提后的总RNA进行纯度、得率和完整性检测以及进一步的RT-PCR检测。结果显示:CTAB改良法和E.Z.N.A.TM总RNA抽提试剂盒Ⅱ均适用于桑椹总RNA抽提,获得的总RNA纯度高、得率高、完整性好,完全可用于后续的分子生物学实验;但两者相比,CTAB改良法成本更低,操作更简单。     

条斑紫菜HSP90基因实时荧光定量PCR检测方法的构建

以管家基因18S rRNA为内参,采用SYBR GreenI荧光染料法,构建了条斑紫菜HSP90基因实时荧光定量PCR的检测方法,为条斑紫菜HSP90和18S rRNA基因筛选出定量引物各1对,获得的扩增曲线基线平整、指数区明显、斜率大且固定。两基因的熔解曲线显示单特异峰,Tm分别为88.5和85℃。两基因标准曲线的斜率分别为-3.307和-3.308,扩增效率都约为100.6%,Ct值在13～32范围内有良好的线性关系。构建的实时荧光定量PCR检测方法灵敏度高、特异性强,准确可靠、重复性好,检测周期短,为进一步研究HSP90基因在胁迫下的表达差异奠定了基础。