基于秀丽隐杆线虫模型探讨白芥子水提物抗氧化作用及机制

摘 要：目的 研究白芥子水提物抗氧化活性,探讨其抗氧化的相关机制。方法 采用2,2-联苯基-1-苦基肼基(2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl,DPPH)自由基、羟基自由基、铁离子还原能力3种方法对其体外抗氧化活性进行评价。采用秀丽隐杆线虫野生型N2线虫观察白芥子水提物对线虫寿命、运动能力、生殖能力的影响;通过氧化应激、热应激、脂褐素和活性氧(reactive oxygen species, ROS)评估其对线虫抗氧化能力的影响。采用实时荧光定量技术测定白芥子水提物作用下线虫抗氧化、胰岛素信号途径相关基因表达情况。结果 白芥子水提物具有一定的DPPH·、羟基自由基清除能力。通过氧化应激筛选出最佳给药浓度为10 mg/mL,且该给药浓度对线虫的运动能力和生殖能力无影响(P>0.05),并能够显著延长线虫的平均寿命和中位寿命(P<0.01);10 mg/mL给药组显著提高线虫抗热应激能力,降低脂褐素积累和ROS水平;同时上调daf-16、sod-3、clt-2、skn-1的mRNA表达量,下调daf-2的mRNA的表达量。结论 白芥子具有良好的体内外抗氧化能力,可能与调控胰岛素/胰岛素样生长因子(insulin like growth factor, IGF)-1信号(insulin/IGF-1 signaling, IIS)通路上的基因表达有关。     

山茱萸多糖延缓秀丽隐杆线虫衰老的药效评价及机制研究

目的 考察山茱萸多糖（Corni Fructus polysaccharides, CFP）对线虫衰老的延缓作用并探讨其作用机制。方法 以野生型秀丽隐杆线虫（N2线虫）作为动物模型,利用百草枯建立氧化应激模型,筛选CFP的最佳药效浓度;测定CFP对N2线虫的急性热应激、寿命、生殖及咽泵运动能力的影响;检测并比较给药组与空白组活性氧簇（Reactive Oxygen Species, ROS）及脂褐素水平;运用实时荧光定量PCR检测CFP对N2线虫衰老相关基因mRNA表达的影响。结果 通过抗氧化应激实验测得CFP最佳给药浓度为150 μg/mL;急性热应激实验中,CFP给药组较空白组的生存曲线右移;不同浓度 CFP给药组较空白组的存活率更高（P<0.01）,平均寿命（P<0.001）和最长寿命均延长;给药组子代数量在第1、3、5、7 d 无显著性差异(P>0.05);50 μg/mL、150 μg/mL的CFP组均可增强N2线虫咽泵运动能力（P<0.05）;不同浓度CFP给药均能显著降低N2线虫体内ROS含量和减少脂褐素沉积;与空白组相比,150 μg/mL CFP给药5 d后,DAF-16、SKN-1、SOD-3及CTL-2的mRNA转录水平均显著上调,AGE-1的mRNA转录水平显著下调。结论 CFP能在一定程度上延缓秀丽线虫的衰老,其作用机制与提高线虫体内抗氧化应激能力、抑制ROS产生、减少脂褐素的沉积,以及调控胰岛素/胰岛素样生长因子-1(IIS)通路上的基因表达有关。     

顶空固相微萃取-气相色谱-质谱联用法分析丁香与肉桂子的香气成分

目的采用顶空固相微萃取结合气相色谱-质谱联用技术(headspacesolid-phasemicroextraction-gas chromatography-massspectrometry,HS-SPME-GC-MS)对天然调味品丁香和肉桂子挥发性成分进行研究,揭示丁香与肉桂子主要香气成分并比较二者差异。方法样品经85℃加热30 min,顶空富集10 min,在250℃解析5min,再利用GC-MS进行测定,对丁香与肉桂子产生独特香气的化学成分进行分析,并用面积归一化法计算各成分的相对百分含量。结果 2种药材共检测到120个峰,共鉴定出56种主要成分。从丁香中检测到60个峰,鉴定出20种成分,占总挥发性成分的98.71%,其主要成分为β-石竹烯、丁香酚、α-律草烯、乙酸丁香酚酯等;从肉桂子中检测到60个峰,鉴定出45种成分,占总挥发性成分的97.31%,其主要成分为肉桂醛、(+)-d-杜松烯、δ-衣兰油烯、(-)-α-蒎烯、(-)香树烯等。结论虽然丁香和肉桂子的性状、气味相似,但所含挥发性成分有所差异,具有9种共同香气成分,其中β-石竹烯为主要香气成分。丁香中的α-律草烯和(-)-氧化石竹烯的含量更丰富,另外6种成分均低于肉桂子。研究结果为分析与鉴别丁香和肉桂子的挥发性香气成分提供科学依据。