产抗菌肽乳酸菌筛选及抗菌肽的分离纯化与特性研究

目的筛选得到产抗菌肽菌株,对抗菌肽进行分离纯化及理化性质研究。方法利用琼脂扩散法筛选产抗菌肽的菌株,运用细胞吸附解吸和阳离子交换层析法纯化抗菌肽,从热稳定性、酸碱稳定性和蛋白酶敏感性3方面研究抗菌肽的理化特性。结果筛选得到7株产抗菌肽的菌株,其中菌株4121具有较广的抑菌谱,命名为鼠李糖乳杆菌4121。对抑菌物质进行分离纯化和理化性质测定,电泳结果显示抗菌肽的分子量约为11 kDa,最终获得的抗菌肽比活力为12379.11 AU/mg,最终纯化倍数为91.99倍。该抗菌肽的抑菌能力在20~80℃及偏酸条件下具有很好的稳定性。同时该抗菌肽对蛋白酶K和α-胰凝乳蛋白酶敏感。结论筛选出的鼠李糖乳杆菌4121所产生的抗菌肽热稳定性及酸稳定性良好,具有广谱抑菌能力,并建立了有效的抗菌肽分离纯化法—细胞吸附解吸-阳离子交换层析法。     

降解草酸盐益生菌的筛选及其体内功效评价

过量草酸积累可引起人体高草酸尿症,从而引发肾结石。降解草酸是预防或缓解高草酸尿症的有效方法。从36株源于健康人体肠道和发酵乳制品的乳酸菌中筛选出1株草酸降解率达到83.6%的阴道乳杆菌(Lactobacillus vaginals) 1F-6;利用急性毒性实验模型探究了L.vaginals 1F-6的安全性;建立高草酸尿症小鼠动物模型,通过测定尿草酸含量、尿素氮肌酸酐水平、SOD活性等指标,对L.vaginals 1F-6的降草酸效果进行分析评价。结果表明,灌胃L.vaginals 1F-6后小鼠体重和脏器指数与对照组没有显著性差异,表明L.vaginals 1F-6对小鼠无急性毒性作用;L.vaginals 1F-6可显著降低小鼠尿草酸含量、减少肾脏草酸钙晶体聚集,并有效缓解由草酸在肾脏过度蓄积引发的尿液离子浓度紊乱和肾氧化损伤,起到保护肾脏的作用。     

转录组学在乳酸菌研究中的应用

转录组学是一门从RNA水平上研究基因表达情况的学科,是一种重要的生命科学研究手段,被广泛应用到多个物种的研究中。乳酸菌作为一类公认安全的食品工业微生物,在发酵食品工业中发挥着重要作用。随着乳酸菌分子水平研究的快速发展,乳酸菌转录组学日益成为研究热点。本文对转录组学及其研究技术进行综述,阐述了转录组学在研究乳酸菌生长代谢调控机制、环境胁迫应激反应、发酵及益生功能中的应用,并对乳酸菌转录组学研究存在的问题及发展趋势进行了讨论,期望为乳酸菌转录组学研究提供参考。     

聚合酶链式反应技术快速检测原料乳中荧光假单胞菌

目的 利用PCR（polymerase chain reaction）技术建立一种快速、准确检测原料乳中最常见有害嗜冷微生物——荧光假单胞菌的方法。方法 以荧光假单胞菌蛋白酶基因aprX为检测靶标,设计特异性PCR简并引物,建立原料乳中荧光假单胞菌PCR检测体系,对该体系的特异性及检测限进行评价。结果 筛选到特异性引物F3：5’-WSNGGNGGNGAYTTYCAYATGAC-3’;R3：5’-RTCRTTNCCNCCNCCRTCCC-3’,建立了最佳PCR检测体系：引物浓度0.5 μmol/L、Taq DNA聚合酶添加量0.4 μL、dNTPs浓度0.16 mmol/L、Mg²⁺浓度1.6 mmol/L,退火温度56.4 ℃,扩增35个循环。此检测方法对荧光假单胞菌具有特异性,检测限为2.57×10³ CFU/mL。结论 本方法操作简便,特异性强,检测限低,对快速检测原料乳中嗜冷菌,保障原料乳品质与安全具有一定参考意义。     

抗菌肽在调节免疫和维持肠道健康中的作用

抗菌肽是生物体产生的一类具有抗菌作用的活性肽,具有安全、不易产生耐药性等优点。抗菌肽不仅可以抑制腐败菌和致病菌的生长,还有助于提高机体免疫力和改善肠道健康,广泛应用于医药、食品、农业等多个领域。肠道除了发挥消化吸收作用外,还是机体最大的免疫器官,对维持人体健康发挥着至关重要的作用。近年来,抗菌肽在调节免疫和维持肠道健康中的作用备受关注。本文综述了抗菌肽在调节免疫和维持肠道健康中的作用,提出了抗菌肽的研究发展新方向,为拓宽抗菌肽的研究与应用领域,发掘抗菌肽的健康功效提供参考。     

α-螺旋抗菌肽YHX-1的从头设计及抑菌活性研究

抗菌肽因其高效的抗菌活性和独特的抗菌机制,不仅可作为生物防腐剂预防食品加工贮藏中的微生物腐败,还有望缓解抗生素滥用引起的耐药性问题。为得到一种高效安全的新型抗菌肽,以现有抗菌肽数据库为基础,确定优化了新型抗菌肽的序列长度、电荷数、氨基酸组成,并结合生物信息学预测及分析工具,从头设计得到了序列为GKLLSKLLKKLLK的新型抗菌肽YHX-1；通过琼脂扩散法、最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度及杀菌动力学曲线评价了其对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的抑菌活性,并进一步测定了YHX-1在盐离子、血浆和微酸性环境中的稳定性、二级结构、溶血活性及细胞毒性。结果表明:YHX-1对6株指示菌均有良好抑菌活性,其中对单增李斯特菌和鼠伤寒沙门氏菌的MIC为4μg/mL,在2h内对单增李斯特菌的致死率为99.99%。YHX-1在盐离子(200mmol/L Na⁺、2mmol/L Ca²⁺)和10%~25%血浆环境中均表现出一定的敏感性,MIC增至原来的2~8倍,而微酸性环境(pH值5.4~7.4)对YHX-1的MIC不会产生显著影响。圆二色光谱表明,YHX-1在细胞膜模拟环境中呈现典型的α-螺旋构象。溶血活性和细胞毒性实验表明,YHX-1具有较好的细胞选择性。YHX-1不仅抑菌谱广、抑菌活性明显,而且具有良好的安全性,有望作为新型抗菌剂应用于食品防腐保鲜,其从头设计策略旨在为新型抗菌肽的发掘提供参考。