鼠伤寒沙门氏菌特异性多克隆抗体的纯化方法

以福尔马林灭活的鼠伤寒沙门氏菌免疫雌性日本大耳兔,制备抗沙门氏菌的多克隆抗体。分别通过辛酸-硫酸铵沉淀法、磁珠偶联抗原吸附法纯化抗体,所制备的抗体效价为3.2×105,纯度较高,但交叉反应现象较严重。本实验以杂菌抗原反向吸附法纯化抗体,有效消除了抗体与杂菌的交叉反应,初步建立了一种高特异性多克隆抗体的纯化方法。     

磁珠离子交换吸附法纯化兔血清中多克隆抗体的研究

以羧基化的超顺磁纳米磁珠作为离子交换吸附介质,建立一种新型的非层析离子交换吸附方法,用于对兔血清中抗副溶血弧菌多克隆抗体进行纯化。通过优化吸附、洗脱缓冲液pH值、盐离子浓度以及洗涤液Tween-20体积分数,确立磁珠离子交换吸附纯化条件,并将该纯化方法和辛酸-硫酸铵法、亲和层析法进行比较。结果表明:血清中的多克隆抗体能够在pH6.0的磷酸盐缓冲液(0.01mol/L)中被磁珠完全吸附,经过含0.1%Tween-20的洗涤液两次洗涤,能够达到较好的洗涤效果,用含0.3mol/L NaCl的磷酸盐缓冲液(pH8.0)可以将吸附的抗体洗脱;经该法纯化后,多抗纯度为82.6%,回收率为58.0%,效价为1/64000;每克磁珠可纯化10mL的血清,整个过程只需要1h。该方法和辛酸-硫酸铵法、亲和层析法相比有明显的优势,因此具有较好的应用前景。     

胶体金试纸条法快速筛查小麦和玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的研究

以抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)单克隆抗体为基础,建立了胶体金免疫层析试纸条检测方法,用于小麦和玉米中DON的快速检测。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,标记抗DON单抗并喷于玻璃纤维垫上,DON-BSA和驴抗鼠二抗均匀划于NC膜上检测线和质控线位置,依次将样本垫、结合垫、NC膜和吸水纸组装切割成试纸条并装入检测卡中。测试结果表明:该胶体金试纸条对纯标准品和人工污染样品的检测灵敏度分别为100μg/kg和500μg/kg,与除15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇外的21种生物毒素均无交叉反应,重复性和稳定性均良好,对实际样品的检测结果与液相色谱串联三重四级杆质谱(LC-MS/MS)比对结果相符。该检测方法非常适合用于现场的快速筛查,具有良好的应用前景。