响应面试验优化木瓜蛋白酶法脱马齿苋多糖蛋白工艺

为确定木瓜蛋白酶法脱马齿苋多糖蛋白的最佳工艺,以酶液-样液体积比、酶解时间、酶解温度及pH值为影响因素,以马齿苋多糖损失率与蛋白去除率为指标,通过响应面试验优化木瓜蛋白酶法脱马齿苋多糖蛋白的工艺条件。结果表明,木瓜蛋白酶法脱马齿苋多糖蛋白的最佳工艺为酶液-样液体积比0.2∶1、酶解温度60?℃、酶解时间3?h、pH?6,在此条件下蛋白去除率为78.22%,多糖损失率为10.39%。马齿苋粗多糖溶液经分离纯化、高效液相色谱分析,结果表明马齿苋多糖由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖单糖组成,其组成比例为5.3∶5.9∶1.3∶27.6∶1∶18.8∶14.6。     

马齿苋多糖的乙酰化修饰及其抗氧化活性

以马齿苋为原料,采用热水浸提法提取马齿苋多糖（Polysaccharides from Portulaca oleracea L.,POP）,采用乙酸酐法制备乙酰化马齿苋多糖（actylated polysaccharides from Portulaca oleracea L.,Ac-POP）。以取代度为指标,通过单因素实验方法考察了反应时间、反应温度和料液比对马齿苋多糖乙酰化修饰取代度的影响,进一步优化了乙酰化修饰马齿苋多糖的工艺条件,并研究了POP和Ac-POP的抗氧化活性。实验结果表明：马齿苋多糖乙酰化修饰的最佳反应时间为2.78 h、反应温度为51.90 ℃、料液比为1:28.15（g/mL）,在该优化条件下,POP乙酰化取代度达到0.60。通过对原多糖和乙酰化多糖的红外光谱检测,显示乙酰化马齿苋多糖制备成功。马齿苋多糖修饰前后对自由基均有一定的清除作用,且呈现一定的剂量关系。在0.05~5.0 mg/mL范围内,修饰前后的马齿苋多糖对DPPH自由基的最大清除率分别为69.73%和64.54%;对?OH的最大清除率分别为43.48%和25.04%;对O2-?的最大清除率分别为78.86%和79.16%。随着浓度的增加,乙酰化马齿苋多糖的抗氧化活性逐渐增大。抗氧化研究表明,与未修饰多糖相比,乙酰化马齿苋多糖对DPPH自由基和?OH的清除能力减弱,但对O2-?的清除能力有较大的增强。