虎奶菇多功能过氧化物酶的基因克隆和表达分析

根据白腐菌多功能过氧化物酶(Versatileperoxidase,VPs)基因序列的保守区域设计引物,利用简并PCR、c DNA末端的快速扩增(RACE)和融合引物巢式结合PCR(FPNI-PCR)等方法,扩增得到虎奶菇多功能过氧化物酶基因(Gen Bank登录号MN701764),命名为Pt-vp1。该基因DNA全长1833 bp,含有15个外显子和14个内含子,c DNA和完整开放阅读框1077 bp,编码358个氨基酸。多种白腐菌VPs氨基酸序列的系统发育结果表明,Pt-vp1蛋白与平菇VP(Gen Bank登录号ASU87523.1)亲缘关系最近。在发酵培养基中静止培养4 d后虎奶菇VP达到最大酶活,为43.83 U/L。在发酵培养基中加入不同浓度Mn2+,当其浓度为200μmol/L时,虎奶菇VP酶活达到最大值,为91.98U/L,表明Mn2+不是虎奶菇产生VP的必要因子,但可以显著提高产酶量。利用实时荧光定量q RT-PCR技术检测不同浓度Mn2+对Pt-vp1基因转录水平的影响,结果显示Mn2+对Pt-vp1蛋白的表达具有促进作用,当Mn2+浓度为300μmol/L时,其转录水平增加了5.79倍。本研究结果为研究虎奶菇VP基因的表达机制及功能研究提供了重要信息。     

虎奶菇Mn-SOD提取、鉴定及基因的克隆

以虎奶菇菌丝为材料,提取、鉴定了虎奶菇锰超氧化物歧化酶,克隆虎奶菇锰超氧化物歧化酶基因。用液氮研磨、超声、硫酸铵沉淀和透析等方法提取虎奶菇Mn-SOD;WST-8 法测定虎奶菇 Mn-SOD 酶活力;H₂O₂ 鉴定虎奶菇 SOD 的类型;用同源克隆、cDNA 末端快速扩增技术和融合引物与巢式 PCR 等方法从虎奶菇中克隆锰超氧化物歧化酶基因。结果表明,虎奶菇 Mn-SOD 酶活力为 1.66 个酶活力单位。酶经过 H₂O₂处理后仍然有活性,与未处理无明显差异,表明虎奶菇中 SOD 主要是 Mn-SOD。克隆获得了虎奶菇锰超氧化物歧化酶基因PtMn-SOD,其DNA序列全长1025 bp,开放阅读框全长为663 bp,编码220个氨基酸。序列分析与系统进化树表明,PtMn-SOD与属于侧耳属的糙皮侧耳(登录号:MH645359.1)关系较近。预测该蛋白质分子量为 24.54 kDa,蛋白等电点为 7.86。PtMn-SOD 蛋白定位于线粒体,在线粒体中发挥功效。     

超声洗梗工艺对烟梗理化特性及卷烟感官质量的影响

为改善烟梗品质,基于传统洗梗工艺条件,采用超声水洗工艺洗梗,并分析了不同水洗条件（水洗方式、水洗时间和温度）对烟梗物理性质、化学成分的影响,阐明了超声水洗对卷烟感官质量产生影响的机理。结果表明：(1)40 kHz超声水洗后制成的卷烟样品感官质量评价结果较好。(2)在相同的温度和水洗时间下,相较于传统水洗,28 kHz和40 k Hz两种频率超声水洗后的烟梗含水率没有差别,洁净度得到明显改善,总色差值较小,导管的微观结构存在变形。与28 k Hz相比,40 k Hz超声水洗后,烟梗的填充性能更优。(3)烟梗中烟碱、总糖、还原糖的质量分数及糖碱比、氮碱比的变化是引起烟梗感官质量产生差异的原因。因此,40 kHz超声水洗可以提高烟梗洁净度,保持烟梗填充性能,改善烟梗化学成分,从而有效提高卷烟感官质量。