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用稀释平板法从土壤样品中分离到166株细菌菌株,通过凝胶法初筛和Folk比色法复筛,得到一株产谷氨酰胺转氨酶(transglutaminase,TGase)的菌株,通过形态学、生理生化特征和16S r DNA序列比对证明该菌株是枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),命名为TGase1318。克隆了该菌株TGase的编码基因tgl,序列长738bp,编码由245个氨基酸组成的蛋白质;TGase的氨基酸序列与NCBI公布的B.subtilis的TGase相似性达94%~100%。用B.subtilis表达载体p TZ和E.coli表达载体p ET21b分别构建了含tgl的重组质粒,转化B.subtilis WB800和E.coli BL21,tgl基因表达产物在70℃下可催化BSA交联,表明tgl在B.subtilis和E.coli中获得了表达且表现出TGase活性,这为其在食品工业上的开发利用打下基础。 相似文献
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在淀粉制糖工业中,普鲁兰酶通常与糖化酶配合使用,其在酸性pH和较高温度下的催化活力是影响淀粉脱支效率的主要因素。该研究通过对长野芽胞杆菌(Bacillus naganoensis)普鲁兰酶蛋白质解折叠自由能的差值(ΔΔG)的计算预测和突变位点稳定性分析,选择突变位点并进行定点突变,获得突变体N467G。与野生型普鲁兰酶分子相比,突变体N467G的最适作用温度提高至60℃,最适作用pH降低至4.5;其在60℃条件下孵育2.5 h或在pH 3.5~5.5孵育1 h残留酶活力均保持在80%以上,稳定性明显提高。此突变体的获得为其后续高效表达与工业化应用奠定了重要基础。 相似文献
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地衣芽胞杆菌α-淀粉酶(Bacillus licheniformisα-amylase,BLA)的耐热耐酸性特征,是其在淀粉酶法加工中最重要的应用属性。在通过人工进化获得BLA突变体V-2的基础上,该研究对其酶学性质进行了较全面的分析。突变体V-2在80℃和pH 5.5下表现出最高酶活力,最适作用温度和pH较BLA提高了10℃和降低了0.5~1.0个pH值,其耐热性和耐酸性显著优于BLA,该突变体的酶活力对金属离子特别是Ca 2+的依赖性显著降低,该酶对淀粉水解作用明显优于BLA,其催化效率是BLA的33倍。 相似文献
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