同步增菌结合实时荧光聚合酶链式反应快速检测食品中5种致病菌

摘 要：目的 实现食品中5种致病菌的同步增菌,并结合实时荧光聚合酶链式反应（real-time polymerase chain reaction,RT-PCR）技术,建立快速检测的方法体系。方法 比较金黄色葡萄球菌、单核增生李斯特氏菌、大肠埃希氏菌O157:H7、副溶血性弧菌和鼠伤寒沙门氏菌5种目标菌分别在营养肉汤和缓冲蛋白胨水中的生长曲线;优化DNA模板提取的方法;采用实时荧光PCR技术及熔解曲线分析,建立5种致病菌的快速检测方法。结果 缓冲蛋白胨水可以作为5种目标菌的同步增菌液,增菌3 h后5种目标菌能被检出,最低检出的DNA浓度范围为10-3~10-4 ng/μL。经熔解曲线分析,5种目标菌的特征熔解Tm值范围为79.51~87.39℃。结论 本研究建立的5种致病菌快速检测方法,检测总时间大约为6 h,且方法灵敏度和特异性均能满足检测要求。     

高效液相色谱法检测食用油中的丙二醛

建立了柱前衍生高效液相色谱检测食用油中丙二醛的方法。样品中的丙二醛用三氯乙酸溶液提取后与硫代巴比妥酸(TBA)进行衍生化反应后,采用液相色谱分离,荧光检测器测定。在优化的条件下,丙二醛的检出限为0.02mg/kg,回收率在87.1%~103.2%之间,相对标准偏差小于6%。该方法具有操作简单、灵敏度高等特点,适用于食用油中丙二醛的测定。     

5种食源性致病菌PCR检测方法的建立

目的建立食品中的沙门氏菌、副溶血性弧菌、大肠埃希氏菌O157:H7、金黄色葡萄球菌和单核细胞增生李斯特氏菌的PCR快速检测方法。方法以缓冲蛋白胨水为增菌培养基,采用直接提取法提取DNA并测定其核酸浓度。对PCR的退火温度、模板浓度进行优化,把5种目标菌分为两组进行检测分析,并进行特异性和灵敏度实验。结果 5种目标菌培养后均表现出良好的生长趋势。PCR扩增最佳退火温度为59℃, 5种目标菌的引物特异性好,方法的检测灵敏度高。沙门氏菌、副溶血性弧菌、大肠埃希氏菌O157:H7、金黄色葡萄球菌和单核细胞增生李斯特氏菌最低检出核酸浓度分别为0.0202、0.158、0.187、2.30和1.05μg/mL。结论该方法简便、快速、灵敏度高,能满足食品安全检测要求。     

熔解曲线结合RT-PCR在餐饮食品中对5种致病菌的检测

建立快速检测餐饮食品中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核增生李斯特氏菌、大肠埃希氏菌O157:H7及副溶血性弧菌5种致病菌的实时聚合酶链式反应体系(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)。通过增菌时间的比较,调整RT-PCR反映体系中的退火温度,建立5种致病菌相同的检测体系。试验结果表明,5个目标菌达到检测灵敏度的最短增菌时间范围为2 h～8 h,5种致病菌的试验灵敏度范围为7.4×10 CFU/mL～2.4×103CFU/mL。5种目标菌的熔解温度Tm值分别为沙门氏菌87.32℃,金黄色葡萄球菌79.57℃,单核增生李斯特氏菌82.02℃,大肠埃希氏菌O157:H7 82.24℃,副溶血性弧菌87.15℃。试验建立的RT-PCR快速检测反应体系,与常规微生物检测方法相比,有效地缩短了检测时间,且灵敏度与特异性均能满足检测要求。     

食品微生物检验的影响因素及质量控制

<正>目前，人们对食品安全有了更高的要求，为了保证食品安全，需要对其微生物检验。但是在实际工作中，微生物检验过程受到多种因素的影响，这就需要对这些影响因素分析、总结，提出质量控制方式。食品微生物检验是在一定条件下对食品中存在的微生物计数，并分析微生物对食品造成的影响，判断其是否符合质量标准。由于食品加工过程中受到诸多因素的影响，导致其卫生情况难以保证，这就需要微生物检验。食品微生物检验又分为传统方法和现代技术两种方法，其中传统方法主要包括培养基法、微生物鉴定法等，现代技术主要包括免疫学分析、计算机辅助检测等。     

不同储存条件下烘炒类花生的品质稳定性研究

针对烘烤类花生产品抽检的酸价、过氧化值不合格的问题，探究不同储存条件下烘烤类花生的品质，并进行货架期评估。设置不同包装材质、光照、脱氧剂和干燥剂的放置、储存温度条件，以酸价、过氧化值为烘炒类花生品质评价指标，比较它们在不同储藏时间内的变化趋势。结果表明，储存温度对酸价、过氧化值影响均较为明显，在温度、时间相同的储存条件下，以氧化铝涂层复合膜袋包装、袋内放置脱氧剂为最优储存方案，能有效地延缓烘烤类花生酸败过程。采用最优储存方案进行长期稳定性试验和比对试验，样品的感官、理化、微生物指标均符合食品安全国家标准，常温储存可达预计的8个月货架期。