香菇菌丝体多糖的分离纯化和抗氧化作用

采用超声破碎和热水浸提相结合的方法提取香菇菌丝体多糖,通过L9(34)正交试验考察料液比、浸提温度、超声强度和浸提时间对多糖提取的影响,确定香菇菌丝体多糖最佳提取条件。利用D EA E-5 2离子交换和SephadexG100凝胶过滤层析纯化香菇菌丝体多糖,紫外扫描和薄膜电泳方法鉴定多糖的纯度;采用DPPH自由基、超氧阴离子自由基和羟自由基清除实验及血浆丙二醛的生成抑制作用和抑制H2O2诱导红细胞氧化溶血检测多糖的抗氧化性。结果表明:香菇菌丝体多糖最佳提取条件为料液比1:15、浸提温度90℃、超声波破碎功率400W、浸提时间3h,最适条件下鲜菌丝体的多糖提取量为3.38‰;纯化后的多糖(LMPⅡ)具有清除超氧阴离子自由基和羟自由基活性的能力,能够抑制血浆丙二醛的生成,抑制H2O2诱导红细胞氧化溶血,且呈现一定效量关系。显示纯化的香菇菌丝体多糖具有较强的抗氧化作用。     

小米抗氧化肽的纯化及其抑制H2O2诱导损伤的胰岛素瘤细胞氧化应激作用

本研究利用Sephadex G-25和DEAE-32对小米抗氧化肽进行纯化,利用醋酸纤维素薄膜电泳法测定小米抗氧化肽的纯度,以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、超氧阴离子自由基、羟自由基清除实验考察纯化的小米抗氧化肽对自由基的清除能力。在细胞水平研究小米抗氧化肽对胰岛细胞的保护作用,利用H2O2进行大鼠胰岛素瘤细胞（INS-1）氧化应激造模,采用2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯荧光探针法检测细胞内活性氧（reactive oxygenspecies,ROS）水平,3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐法检测细胞活力,采用流式细胞技术检测细胞凋亡率,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测抗氧化酶的表达水平。结果表明：经过Sephadex G-25和DEAE-32两次层析,小米抗氧化肽达到了电泳纯;50 μg/mL小米抗氧化肽对超氧阴离子自由基、羟自由基和DPPH自由基的清除率分别为（62.71±3.86）%、（73.56±4.51）%和（82.62±5.25）%;小米抗氧化肽能显著提升H2O2损伤后细胞活力,降低细胞内ROS水平,抑制H2O2诱导损伤的INS-1细胞的凋亡（P＜0.05）,其可能的机制与超氧化物歧化酶1、过氧化氢酶、谷胱甘肽巯基转移酶、醌氧化还原酶1等抗氧化酶系的表达上调有关。结论：小米抗氧化肽对H2O2诱导损伤的INS-1细胞氧化应激具有一定的保护作用。     

小米抗氧化肽的纯化及其抑制H_2O_2诱导损伤的胰岛素瘤细胞氧化应激作用

本研究利用Sephadex G-25和DEAE-32对小米抗氧化肽进行纯化,利用醋酸纤维素薄膜电泳法测定小米抗氧化肽的纯度,以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基、超氧阴离子自由基、羟自由基清除实验考察纯化的小米抗氧化肽对自由基的清除能力。在细胞水平研究小米抗氧化肽对胰岛细胞的保护作用,利用H_2O_2进行大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1)氧化应激造模,采用2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯荧光探针法检测细胞内活性氧(reactive oxygenspecies,ROS)水平,3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐法检测细胞活力,采用流式细胞技术检测细胞凋亡率,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测抗氧化酶的表达水平。结果表明:经过Sephadex G-25和DEAE-32两次层析,小米抗氧化肽达到了电泳纯;50μg/mL小米抗氧化肽对超氧阴离子自由基、羟自由基和DPPH自由基的清除率分别为(62.71±3.86)%、(73.56±4.51)%和(82.62±5.25)%;小米抗氧化肽能显著提升H_2O_2损伤后细胞活力,降低细胞内ROS水平,抑制H_2O_2诱导损伤的INS-1细胞的凋亡(P0.05),其可能的机制与超氧化物歧化酶1、过氧化氢酶、谷胱甘肽巯基转移酶、醌氧化还原酶1等抗氧化酶系的表达上调有关。结论:小米抗氧化肽对H_2O_2诱导损伤的INS-1细胞氧化应激具有一定的保护作用。     

一株SOD生产菌的分离、初步鉴定和产酶条件优化

为得到高产超氧化物歧化酶(SOD)的菌株,通过稀释平板法从土壤中进行SOD生产菌株分离和筛选,利用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和氯化硝基四氮唑蓝(NBT)染色法鉴定SOD,采用抑制剂实验分析SOD类型,利用生理生化性质分析和16S rDNA亲缘关系分析进行种属鉴定,并进一步研究碳源、氮源、碳氮比、接种量和装液量对发酵产酶的影响。结果表明：SOD活性染色显示一条条带,说明只产一种SOD同工酶。该SOD对氯仿-乙醇敏感,对H2O2不敏感,为Mn-SOD。理化性质和16S rDNA序列分析初步鉴定该菌为肠杆菌科沙雷氏菌属。发酵条件优化结果表明产酶最佳条件为：最佳碳源为玉米粉,最佳氮源为蛋白胨,碳氮比4:1,接种量8%,250mL三角瓶装液量70mL。     

平菇菌丝体多糖的分离纯化和体外抗氧化活性

采用酶法提取平菇菌丝体多糖,通过L9(34)正交试验考察加酶量、温度、时间、pH 值对平菇菌丝体多糖提取率的影响,确定其最佳提取条件;通过DEAE-32 离子交换层析和Sephadex G100 凝胶过滤纯化平菇菌丝体多糖,DPPH 自由基清除作用测定抗氧化活性,紫外光谱扫描和薄膜电泳方法鉴定多糖的纯度;利用化学比色法检测其对O2－·和·OH 的清除能力和对小鼠红细胞溶血抑制程度。结果表明：平菇菌丝体多糖最佳提取条件为加酶量1.0%、温度55℃、时间2h、pH5.3,最佳条件下多糖提取率为(4.91 ± 0.15)%;纯化后的多糖能清除O2－·和·OH 及抑制红细胞溶血的生成,且呈现一定剂量关系。表明平菇菌丝体多糖在一定浓度范围内具有体外抗氧化作用。