抗羟基红花黄色素A抗血清的制备

目的:通过人工抗原的构建,制备抗羟基红花黄色素A(HSYA)的特异性抗血清.方法:采用直接合成法将HSYA与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋A(OVA)的共价偶联,分别合成免疫抗原HSYA-BSA和包被抗原HSYA-OVA,并进行相关鉴定:用合成的人工抗原免疫家兔,制得抗羟基红花黄色素A的特异性抗血清,采用酶联免疫法鉴定.结果:根据建立的标准曲线方程计算得HSYA和BSA的结合比是50:1,HSYA和OVA的结合比是112.8:1:理想的包被抗原的浓度为4μg/ml,抗血清和二抗的工作浓度分别为1:200和1:2000;交叉反应实验表明,该抗体与芦丁、金合欢素的反应率均接近于零;亲和性实验结果表明,在0.25～2μg/ml浓度范围内,抑制率与浓度呈线性关系,线性回归方程为y=-16.2131gx+102.47(r=0.9575),抑制中浓度IC<,50>为1.5μg/ml,最低检测限为0.250μg/ml.结论:通过直接偶联法可以成功制备出具有抗羟基红花黄色素A的特异性抗血清.     

羟基红花黄色素A人工抗原两种制备方法的比较

目的:对过碘酸钠法和直接法制备的羟基红花黄色素A全抗原进行比较,以期获取理想的羟A人工抗原.方法:通过透析液的颜色变化、紫外扫描、红外扫描及动物免疫试验等比较两种方法合成的人工抗原特点.结果:两种方法制备的人工抗原在紫外扫描中都有蛋白的特征吸收峰.只是受偶联基团的影响特征峰都蓝移到275 nm附近,但是直接法的400 nm处羟A特征峰保留,过碘酸钠法的消失.对直接法的偶联物进行红外扫描,显示羟A特征官能团的吸收峰和蛋白的特征吸收峰.过碘酸钠法的经过五免老鼠仍然监测不到针对羟A的特异性抗体,用直接法的免疫抗原继续免疫二次产生了抗羟A的特异性抗体,三免血清效价达1:3200;用直接法的免疫两只新西兰大白兔六免抗HSYA抗体效价达1:3200以上.结论:直接法适合制备羟A人工抗原,可以为后续研究奠定可靠的前提条件.     

一种多孔硅生物免疫传感器的研究

对多孔硅样品进行热氧化和硅烷化处理,通过共价结合的方法将HYSA生物抗体固定到多孔硅的孔洞中;测量了加入BSA发生抗原抗体反应前后的荧光光谱和反射谱.实验结果表明加入生物分子后多孔硅发光峰消失,抗原抗体反应后发光强度增强,反射谱红移.该项研究为开发免标记的多孔硅光学生物免疫传感器奠定了基础.