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免疫胶体金标记扫描电镜法是70年代后期发展起来的新技术,对检查细胞膜的抗原分布和变化有特殊的优点,但该法要求较高活性大颗粒(50nm)胶体金和高分辨扫描电镜,目前我们无这种条件,为此,我们将光镜的免疫金银法过渡到扫描电镜。另外,为解决血浆对血细胞的影响,采用了试管内免疫胶体金一次性染色法,用这种方法检查了血细胞膜谷胱甘肽过氧化物酶和泛素肽(Ubiqnitin)效果良好。经各种对照(去抗体;去胶体金;单纯硝酸银;免疫胶金透射电镜检查;)证明扫描电镜下颗粒物是特异性免疫颗粒。说明免疫金银扫描电镜法有应用价值。主要方法步骤是:1.取适量静脉血注入试管,加2%多聚甲醛一戊二醛液与其混匀,在4℃下固定1小时;2.用TBS缓冲液反复冲洗;3.其余程序同免疫金常规 相似文献
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碱性磷酸酶和5'—核苷酸酶活性主要定位于脑膜瘤毛细血管内皮细胞膜上。碱性磷酸酶活性还定位于砂粒型脑膜瘤细胞质膜和内质网上。Na~+-K~+-ATP酶活性定位于脑膜瘤细胞质膜上。酸性磷酸酶和胞嘧啶单核苷酸酶活性定位于瘤细胞溶酶体。焦磷酸硫胺素酶活性定位于高尔基体和内质网。文中对不同亚型脑膜瘤酶活性强度和定位差异进行了讨论。 相似文献
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手术切除脑膜瘤8例,经病理检查亚型分为纤维型、脑膜上皮型、砂粒型和血管瘤型脑膜瘤,分别进行碱性磷酸酶(ALP)、5′—核苷酸酶(5′—Nase)、酸性磷酸酶(ACP)、胞嘧啶单核苷酸酶(CMP酶)和焦磷酸硫胺素酶(TPP酶)电镜细胞化学研究,结果如下:人脑膜瘤ALP主要定位于毛细血管内皮细胞膜上,在不同亚型脑膜,ALP反应强度和定位不同,砂粒型脑膜瘤瘤细胞质膜、细胞内粗面内质网显示很强的ALP阳性反应,其余亚型脑膜瘤瘤细胞ALP为阴性反应。5′—Nase主要定位于各亚型脑膜瘤的细胞质膜上。其中砂粒型脑膜瘤瘤细胞质膜上5′—Nase活性最强,血管瘤型脑膜瘤瘤细胞质膜上5′—Nase活性最弱,但在核膜上有较多的5′—Nase反应产物。该亚型 相似文献
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电镜酶细胞化学是在超微结构水平上研究酶的活性定位和变化的新技术。用此技术,有利于综合分析细胞的超微结构特征与酶活性分布之间的相互联系,对研究各种生理病理情况下酶的定位和代谢特征有很重要的意义。近年来,我们摸索、引用或改进了十八种酶(5′—核苷酸酶、核苷二磷酸酶、钠—钾—ATP酶、Mg~(++)-ATP酶、Ca~(++)-ATP酶、细胞色素氧化酶、腺苷酸环化酶、糖原合成酶、LDH、MAO、ALP、ACP、AChE、SDH、CMP酶、TPP酶、G-6-P酶、NADP酶)的电镜细胞化学方法,并应用于高压氧医学和脑肿瘤酶活性定位研究。在应用中我们体会到:(1)用2%多聚甲醛—0.5%戊二醛(0.1M二甲砷酸缓冲液或PBS配成,加6.5%蔗糖)混合固定液固定对大多数酶是合适的。少数酶如SDH不耐固定,须用 相似文献
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一般酶活性的超微结构定位都用透射电镜进行观察。用扫描电镜观察酶活性定位、并结合X-射线微区分析鉴定酶反应特异性的报道极少。我们采用铈-铅-银法对分离的兔额叶大脑皮质单个神经元进行5’-核苷酸酶和p-NPP酶反应,用光镜和扫描电镜观察酶反应定位,并用X-射线微区分析(EDAX 9100能谱仪)鉴定酶反应的特异性,取得了较好的结果。兔大脑额叶皮层经固定和酒精分化,在盖玻片上分离出单个神经元,进行5’-核苷酸酶和p-NPP酶铈法反应,又进行铈-DAB法、铈-铅法和铈-铅-银法处理,从而在光镜下能观察到神经细胞质膜和突起的膜上所显示的5,-核苷酸酶和p-NPP酶阳性反应部位,其中以后者处理的样品显示出最强的酶反应 相似文献