HiTrap Q柱FPLC快速纯化人血清白蛋白（HSA）

为研制新型三、四天线半乳糖肝受体功能显像剂,须将三、四天线半乳糖与人血清白蛋白(HSA)偶联,故必须制备较纯净人血清白蛋白(HSA).在FPLC上用HiTrap Q柱快速纯化人血清白蛋白(HSA).经PAGE和SDS-PAGE鉴定只有一条带.在FPLC上用HiTrap Q柱纯化HSA有速度快、纯化量大且方法较为简便等特点.     

~(125)I-白蛋白融合干扰素α2b大鼠体内排泄研究

为研究125I-白蛋白融合干扰素α2b大鼠体内排泄行为,利用氯胺-T法制备了125I-白蛋白融合干扰素α2b,其标记率为82.72%,放化纯度为95.53%,放射性比活度为0.26MBq/μg。体外WISH/VSV系统抗病毒活性比较分析表明,白蛋白融合干扰素α2b和125I-白蛋白融合干扰素α2b具有相近的抗病毒活性。SD大鼠皮下注射125I-白蛋白融合干扰素α2b后,0～6、6～12、12～24、24～48、48～96、96～192和192～300h7个不同时段的尿、粪的放射性分析结果表明,125I-白蛋白融合干扰素α2b主要通过肾脏排泄,部分可通过粪便排泄,300h时尿、粪中平均累积排泄率分别为80.10%和16.00%;0～1、1～2、2～4、4～6、6～12、12～24和24～30h7个不同时段的胆汁的放射性分析结果表明,125I-白蛋白融合干扰素α2b也可通过肝脏代谢后经胆汁排泄,但这不是它的主要排泄途径,30h时,胆汁中的平均累积排泄率仅为1.61%。     

~(99)Tc~m-半乳糖基化人血清白蛋白融合干扰素α2b的制备和生物分布

用氯化亚锡(SnCl2)还原法制备99Tcm-半乳糖基化人血清白蛋白融合干扰素α2b(GHSA-IFNα2b),研究了SnCl2和GHSA-IFNα2b的用量以及溶液pH对99Tcm-GHSA-IFNα2b标记率的影响;ICR小鼠尾静脉注射99Tcm-GHSA-IFNα2b(0.286MBq/只,n=6),于5、10、15、30、60、120min取脏器和血,称重、计数,计算%ID(organ)-1和%ID·g-1;并对99Tcm-GHSA-IFNα2b的SD大鼠显像进行了研究.结果表明,在pH=3.0～4.5、GHSA-IFNα2b的用量≥0.3 mg、SnCl2的用量为3～60 μg时,37℃反应30 min,可得标记率＞90%的99Tcm-GHSA-IFNαt2b,并在6 h内保持基本稳定;肝脏组织中的99Tcm-GHSA-IFNα2b在注射后10 min高达52.51%ID(organ)-1,能够被肝脏特异性摄取,主要通过胆道、肠道排泄;大鼠静脉注射15～30 min时,即可获得清晰的肝显像.     

CA125时间分辨荧光免疫分析

以CA125单克隆抗体固相包被,用平衡饱和法与CA125、Eu^3 标异硫氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸－CA125单抗形成三层夹心,以β－二酮体为增强液,建立CA125的时间分辨荧光免疫分析法。数据采用Logit-Log函数和四参数Logistic函数数据处理程序处理。方法的批内和批间CV分别为4．5％和4．0％,平均回收率96．7％,灵敏度3．3μg/L,可测范围为16－2062μg／L。本法与CEA无交叉,与AFP有4．6％交叉,与β－HCG有12．4％交叉。测定结果与进口IRMA试剂盒相比较,相关系数为0．999,结果呈高度相关。     

~(125)I-白蛋白融合干扰素α2b大鼠体内分布研究

采用氯胺-T法对白蛋白融合干扰素α2b进行125I标记,PD-10柱纯化,三氯醋酸沉淀法测定放化纯;体外以WISH/VSV系统比较白蛋白融合干扰素α2b和125I-白蛋白融合干扰素α2b的抗病毒活性;SD大鼠皮下注射125I-白蛋白融合干扰素α2b,分别于给药后0.5、2、6、24、48、90、180、300 h放血处死,取血和相关脏器,称重并测定放射性,计算每克脏器放射性占注入量的百分率(%ID·g-1).结果显示,氯胺-T法制备的125I-自蛋白融合干扰素α2b标记率为82.72%,放化纯95.53%,放射性比活度为0.26 MBq/gg;抗病毒活性比较结果表明标记前后的生物学活性几乎无变化;皮下注射大鼠体内分布研究表明,125I-白蛋白融合干扰素α2b在血中于6 h达高峰,消除缓慢,未见特异性组织或器官的浓聚.     

丙型肝炎病毒抗体时间分辨免疫荧光分析及应用评价

为建立抗-HCV的时间分辨免疫荧光分析法（IFMA）、以HCV抗原包被微孔板，样品中的抗-HCV、Eu^3 标记羊抗人IgG形成夹心，以β-二酮体为增强液，数据采用Log-Logit函数和四参数Logistc函数数据处理程序处理。结果表明，方法的批内和批间CV分别为3.64%和4.39%，平均回收率105.58%，可测范围为1.01-17.34NCV/mL，灵敏度为0.03NCU/mL。本法与HBsAg有0.23%的交叉，与HBeAg有0.04%的交叉。278例正常对照组血清抗-HCV浓度均小于1NCU/mL。结果提示，高度灵敏、稳定的抗-HCV IFMA方法的建立为临床和科研工作提供了一种非放射性标记定量检测分析的方法。     

以凝血酶为血栓形成体内定位靶的放射显像条件研究

文章涉及一种凝血酶(Th)的有效抑制剂——重组水蛭素(rHHV2),评价其作为血栓形成诊断工具的可能性。采用氯胺-T法制备了I-rHHV2和I-Th,标记率分别为86.64%和62.20%,125125放化纯分别为89.70%和91.22%,比放射性分别为22.4和94.3TBq/mmol。于预包被纤维蛋白原或Th的塑料小珠上进行放射性竞争分析显示,Th-纤维蛋白复合物的形成不影响rHHV2与其上的Th结合;在rHHV2,Th和纤维蛋白原形成的三元复合物中,其分子比为14141。99mTc-rHHV2的制备采用亚氨基噻吩盐酸盐修饰法,标记率为90.81%,放化纯为93.9%,比放射性为2.30TBq/mmol,犬和兔血栓模型显像用量为30μg/kg。SPECT显像分析表明血栓清晰可见,且动静脉血栓显像结果差异明显。动脉血栓在给药后45min显像清晰,随后影像逐渐减退;静脉血栓在给药后30min开始显像,并随时间的延长影像趋于清晰。小鼠体内分布证明rHHV2主要从泌尿系统排泄。这些结果说明靶向Th-纤维蛋白复合物中Th的99mTc-rHHV2可望成为一种新的血栓显像剂。     

同位素法体内示踪HSA-IFNα2b的方法学研究

采用氯胺-T法制备了125I-HSA-IFNα2b,标记率为82.72%,放射化学纯度>95%,放射性比活度为0.26MBq/μg。体外WISH/VSV 系统抗病毒活性分析表明125碘标记对HSA-IFNα2b的生物学活性几无影响。125I- HSA-IFNα2b的血清回收试验和组织回收试验结果均表明回收率均符合方法学考核要求。125I-HSA-IFNα2b的溶液干扰、血清样品干扰和组织样品干扰实验的研究结果表明溶液、血清和组织样品对测定均无干扰,可以直接进行测定。因此,可以采用125I-HSA-IFNα2b同位素示踪法进行HSA-IFNα2b的体内分布排泄研究。     

应用99mTc-NGA进行肝ASGP受体显像的实验研究

新半乳糖人血清白蛋白（ＮＧＡ）是肝细胞表面去唾液酸糖蛋白受体（ＡＳＧＰＲ）的特异性配基。根据受体与配基结合的原理，报道了以＾９９ｍＴｃ标记的人血清白蛋白（ＨＳＡ）在正常兔中显像行为的对比。结果表明＾９９ｍＴｃ－ＨＳＡ呈现血池显像剂的行为，而＾９９ｍＴｃ－ＮＧＡ则呈现肝脏受体显像剂的行为，并且若兔事先用１００倍量未标记的ＮＧＡ将肝脏受体饱和后，再用＾９９ｍＴｃ－ＮＧＡ显像则呈现与＾９９ｍＴｃ－ＨＳＡ     

肝ASGP受体功能显像剂的制备及显像研究

采用ＦＰＬＣ快速纯化人血清白蛋白，利用双功能试剂２－亚胺基－２－甲氧基乙基－１－硫代－半乳糖甙与伯胺基的成脒反应，将工半乳糖残基引入人血清白蛋白分子，得到平均糖密度为３０的新半乳糖人血清白蛋白（ＮＧＡ）；用直接法制备＾９９ｍＴｃ－ＮＧＡ，其放化纯大于９０％，且室温下可稳定６ｈ以上，符合显像要求。＾９９ｍＴｃ－ＮＧＡ小鼠体内分布实验及大鼠、兔和狗的显像研究均表明＾９９ｍＴｃ－ＮＧＡ能够被肝脏特异摄取