丙型肝炎病毒多表位基因核酸疫苗的构建及其免疫原性

目的构建丙型肝炎病毒(HCV)多表位基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-CtEm,用该重组质粒免疫BALB/c小鼠,并检测其免疫原性。方法用BamHⅠ和HindⅢ双酶切含有HCVC区、E2区模拟表位和NS3~NS5区细胞表位串联基因的原核表达载体pQE30-CtEm,克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-),脂质体瞬时转染CHO细胞,并检测其表达。以100μg重组质粒免疫BALB/c小鼠,检测其体液免疫和细胞免疫效果。结果所构建的真核表达载体pcDNA3.1(-)-CtEm在CHO细胞中能获得有效表达。该质粒免疫小鼠后可诱导高水平的抗体,特异性淋巴细胞增殖反应、IFN-γ水平及CTL活性均明显高于空载体和生理盐水对照组。结论已成功构建HCV多表位基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-CtEm,免疫小鼠后可诱导特异性体液免疫和细胞免疫应答。     

原油流动性改进方法研究现状

针对原油在开采、集输等环节易产生结蜡、高凝点、高黏度、流动性差、流动阻力大等问题,综述了改进原油流动性的方法。原油流动性改进方法主要包括热处理法、掺稀油法、乳化降黏法、添加原油流动性改进剂、原油热催化降解改质、微生物法。总结了目前原油流动性改进方法的机理、优点以及存在的问题,展望了原油流动性改进方法的应用前景。     

基于嵌入式X-BOARD的远程控制系统设计

电气系统的小型化、模块化并具备远距离操控能力是当前光电跟踪设备进一步发展的需求.本文主要介绍了采用以太网+嵌入式系统模式.构建一种基于DSP和嵌入式X-BOARD处理器的远程控制系统.重点介绍了该系统的软件设计、硬件构成以及通过以太网与DSP实时数据交换与控制的实现方法.在此基础上研制了小型化、模块化、可远程操控的控制系统.该系统由DSP实时控制模块和嵌入式接口子模块组成,前者挂接了数据采集通路和PWM驱动级,后者在实时操作系统VxWorks下,完成以太网数据的收发和与DSP实时数据的交换.经某跟踪控制平台验证,该系统能达到远程控制的要求,具有明显的优越性.     

原油石蜡结晶与清除的研究进展

本文综述了含蜡原油中石蜡结晶的机理,介绍了国内外的几种清蜡技术,探讨了各种清蜡技术的优缺点,详细分析了清蜡效果的影响因素,提出环保、低成本、高效率、适应性强的新型清蜡剂将是未来清蜡剂的研究方向。     

蚕豆真空油炸试验研究

以慈溪所产大白蚕豆为原料，研究了浸渍、冷冻以及热风干燥对真空油炸脆蚕豆品质的影响。结果表明：浸渍、冷冻以及热风干燥显著影响脆蚕豆的水分含量和含油率，且蚕豆初始水分含量与其含油率之间存在显著的相关性。浸渍和热风干燥预处理技术可以显著降低产品的含油率，而且不影响其脆度和主要色泽值。     

丙型肝炎病毒中和抗原表位与乙型肝炎病毒S抗原嵌合基因重组真核表达质粒的构建及其在293T细胞中的表达

目的构建丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)中和抗原表位与乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)S抗原嵌合基因真核表达质粒,并在293T细胞中进行表达。方法从含HBV全序列的质粒pHBV中扩增HBV S抗原基因,在HBV S疏水区127和128位氨基酸序列处引入AgeⅠ酶切位点,将HCV E1和E2区保守的线性中和抗原表位及HVR1的模拟表位基因分别插入该位点,获得嵌合HCV中和抗原表位的重组HBV S基因,将该基因克隆至真核表达载体pCI-neo中,构建重组真核表达质粒pCI-HBSE1～4。将4种重组真核表达质粒转染293T细胞,间接免疫荧光和Western blot检测嵌合基因的表达。结果 4种重组真核表达质粒经双酶切证实构建正确;4种重组质粒转染的293T细胞胞浆内可见较强的绿色荧光,Western blot显示,在相对分子质量约27 000处可见蛋白条带。结论成功构建了HCV中和抗原表位与HBV S抗原嵌合基因真核表达质粒,其在293T细胞中可有效表达,为进一步制备嵌合HCV中和抗原表位的HBV S抗原VLP,研究中和抗体对HCV假病毒颗粒(HCVpp)和JFH-1 HCV体外培养系统(HCVcc)感染的抑制作用奠定了实验基础。     

稳定表达丙型肝炎病毒HLA-A2限制性多表位基因C1R-AAD细胞克隆的建立

目的建立稳定表达丙型肝炎病毒(HCV)HLA-A2限制性多表位基因的C1R-AAD细胞克隆。方法合成人泛素基因(Ub)和HCVHLA-A2限制性多表位基因(Mep),分别克隆入原核表达质粒pRSET-A,构建多表位抗原基因的原核表达质粒pRSET-Ub-Mep。用BamHⅠ和HindⅢ双酶切质粒pRSET-Ub-Mep,得到复合多表位基因Ub-Mep,亚克隆入真核表达载体pcD-NA3.1(-),构建重组真核表达质粒pcDNA3.1(-)-Ub-Mep,转染至C1R-AAD细胞,G418压力筛选后,通过有限稀释法获得稳定表达Ub-Mep融合蛋白的C1R-AAD细胞克隆,采用RT-PCR法检测稳定转染细胞中Ub-Mep基因mRNA的转录;间接免疫荧光法和Westernblot法检测Ub-Mep蛋白在稳定转染细胞中的表达。结果重组真核表达质粒pcDNA3.1(-)-Ub-Mep经酶切鉴定证明构建正确;在稳定转染的C1R-AAD细胞中可检测到Ub-MepmRNA和蛋白水平的表达。结论已建立了稳定表达HCVHLA-A2限制性多表位抗原的C1R-AAD细胞克隆,为进一步研究HLA-A2限制性多表位基因诱导的细胞免疫应答建立了靶细胞。