耐高温α-淀粉酶高密度高表达发酵条件的优化

通过摇瓶实验对产耐高温α-淀粉酶的重组菌E.coli BL21的高密度高表达发酵条件进行研究。考察不同培养基和不同发酵条件对该菌株产耐高温α-淀粉酶的影响,并利用正交试验进行优化。结果表明:在葡萄糖0.5g/L,酵母粉15g/L,pH6.5,诱导时机为接种后发酵4h,诱导时间为6h,IPTG添加量为0.8mmol/L,接种量为体积分数3%的优化条件下,该重组菌发酵液菌体生物量为原来的1.29倍,酶活力达到8.754U/mL,是原来的1.55倍,目的蛋白的表达量也为原来的1.24倍。     

鱿鱼肝脏蛋白中α-葡萄糖苷酶抑制肽的研究

通过酶解技术和凝胶过滤分离等技术对鱿鱼肝脏蛋白水解液中活性肽进行研究,为鱿鱼副产物的高效利用奠定了理论基础。实验得出:6种蛋白酶(酸性蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶)中,胃蛋白酶为鱿鱼肝脏蛋白水解的最佳酶类,同时以水解度和α-葡萄糖苷酶(AG)抑制活性为指标,得出胃蛋白酶水解的最佳条件:底物浓度0.4%,酶与底物的质量比3.0%,体系p H3.0,温度37℃,反应时间12 h。经过上述条件处理后的水解液用Sephadex LH-20凝胶层析柱进行分离,得到6个组分,其中组分Ⅲ的AG抑制活性最高,其半抑制浓度(IC50)达到0.215 mg/m L。同时对组分Ⅲ的稳定性和抑制动力学进行研究,得出组分Ⅲ对酸碱、热及消化道酶系统具有较高的稳定性。对AG为典型的非竞争性抑制,其米氏常数为50 mmol/L。     

甲壳素制备含氮化学品的研究进展

甲壳素可转化为多种高附加值产品和系列化学品。该文综述了以甲壳素及其降解产物N-乙酰氨基葡萄糖转化制备平台化合物3-乙酰氨基-5-乙酰基呋喃和其他含氮化合物等化学品的最新研究进展。对以3-乙酰氨基-5-乙酰基呋喃作为平台化合物进一步转化为其他化合物进行了概述，并对这些领域的研究方向进行了展望，以期促进甲壳素转化含氮化学品领域的发展。     

Thermococcus siculi HJ21 α - 淀粉酶Asp186定点突变对酶活性的影响

为确定超嗜热古菌Thermococcus siculi HJ21α-淀粉酶(TSA)中特定氨基酸及所在位点与酶活性间的关系,以含TSA基因的pEt-28a-His6质粒为模板,利用定点突变技术,将第186位点的天冬氨酸(Asp)突变为天冬酰胺(Asn),突变子转化至E. coli BL21(DE3)并经IPTG诱导表达,测定突变前后的酶活性,定点突变后的TSA无酶活性;采用DNAStar和Deepview蛋白分析软件,预测突变前后TSA蛋白的二级结构和三级结构,结果表明Thermococcus siculi HJ21α-淀粉酶的186位点对维持TSA的酶活性具有重要意义,它的突变导致酶蛋白二级结构组件及氢键网络的改变。     

蚕丝素蛋白及其应用

阐述了丝素蛋白的组成、结构、性质和制备方法 ,及其综合利用现状。丝素作为一种天然蛋白质在医学和食品等行业中的应用开发研究具有深远的意义。     

乙酸溶胀-挤压提取对罗非鱼真皮胶原蛋白理化性质的影响

以磷酸预处理辅助实现罗非鱼皮真皮与表皮的分离,采用低温乙酸溶胀法提取真皮中的胶原蛋白,并对所得胶原蛋白样品进行理化性质分析。结果表明,在4℃环境中,以0.006 mol/L磷酸、50 g/L料液处理鱼皮3 h,可获得最佳真皮、表皮分离效果。所得真皮在4℃环境中,以0.035 mol/L乙酸溶液(料液质量浓度为100 g/L)溶胀处理6 h,挤压后可得羟脯氨酸质量分数为7.9%的真皮胶原蛋白样品,提取得率达27.6%(干基)。凝胶电泳结果分析表明,所得样品主要含有α1、α2和β链,由紫外光谱分析结果可知其最大吸收在230 nm波长附近,符合典型Ⅰ型胶原蛋白特征;衰减全反射傅里叶变换红外光谱分析结果显示其三螺旋结构得到较好地保留。样品热变性温度及热收缩温度分别为29.2℃和55.0℃。研究结果为鱼皮资源的高效开发利用以及高品质胶原蛋白的制备提供了理论参考。     

酶固定化载体材料的研究进展

酶固定化的载体材料必须与酶的非催化活性基团发生有效结合方能使固定化酶发挥其催化酶解作用,载体材料的确定是酶的固定化技术关键。随着化学工业的不断进步,研发出众多具有特殊结构且功能各异的新材料,推动了载体固定化酶技术的发展。结合目前固定化酶技术的研究现状和应用情况,本文介绍了酶的固定化载体常用的高分子材料、磁性材料、纳米材料和介孔材料的研究现状,比较了上述材料与酶的结合机制。简述了固定化酶的制备方法和应用形式,并对固定化酶载体材料的研究进展进行了总结,以期对酶的固定化材料研究提供参考。     

珠蛋白水解液生物活性的初步研究

目的探讨珠蛋白胃蛋白酶水解液的生物活性。方法利用优化的Cushman的方法、Guzman-Partida报道的方法、Ayers报道的大豆子叶法和方中达报道的抗烟草花叶病毒方法分别测定了对血管紧张素I转换酶(ACE)的抑制活性、对血红细胞的凝集活性和对植物的诱抗活性。结果富含小分子肽的珠蛋白水解液在水解度为12.6%时,对ACE的抑制率最高;在显微镜下观察水解液对血红细胞有一定的凝集作用;在500mg/L的浓度下对植物的诱抗活性与50mg/L的壳寡糖相当。结论珠蛋白的胃蛋白酶水解液具有很好的生物活性,为猪血在制药、食品以及绿色农药方面的利用提供了必要的理论支持。     

海带ACE酶抑制剂的浸提工艺研究

以海带为研究对象,采用RP-HPLC法测定其水浸提液对ACE酶活性的抑制作用,从而探讨海带浸提液的降血压活性。通过单因素实验和正交实验,考察浸提料液比、浸提时间、浸提温度对海带浸提液活性的影响。结果表明,浸提的最佳工艺条件是料液比1:200,在30℃的水浴中浸提24h。在此条件下所得的海带根部浸提液、中部浸提液和假根浸提液对ACE酶活性的抑制率分别为66.7%、22.8%及80.7%,海带假根浸提液的活性最强。对浸提液的成分分析结果表明,海带假根浸提液中蛋白质、碘、总糖及岩藻聚糖硫酸酯含量最低,而氨基酸、钙离子和硫酸根含量最高。钠、镁、钾三种元素在海带根部、中部及假根浸提液中的含量差别不大。     

鱿鱼副产物的综合利用

介绍了鱿鱼加工副产物的研究现状和综合开发利用的前景。鱿鱼皮可提取胶原蛋白,内脏可以制成饲料、提取富含二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)的鱿鱼油、提取核酸等。作者将鱿鱼肝脏提取鱼油后得到的粗蛋白用蛋白酶水解,发现其水解产物具有明显的血管紧缩素抑制活性。