孔雀石绿多克隆抗体的制备与筛选

设计并成功合成了三种孔雀石绿半抗原,所有半抗原均采用活化酯法分别与血匙兰蛋白(KLH)偶联制备成免疫抗原,与卵清蛋白(OVA)偶联制备成包被抗原。利用所制备的三种免疫原免疫新西兰大耳白兔都获得了高效价的抗孔雀石绿抗体,并将每一种抗体都与三种包被抗原进行组合配对,通过间接竞争酶联免疫吸附检测(ELISA)方法筛选出最佳的抗体-包被抗原组合,筛选出的抗体采用Sepharose FF-Protein A亲和层析柱纯化,采用间接ELISA法测定效价及鉴定特异性。经测定筛选出的抗体效价达到1:12000,IC50值为0.65 ng/mL,交叉反应表明该抗体有较好的特异性,与结构类似物结晶紫的交叉反应率为18.73%,与隐性孔雀石绿及隐性结晶紫的交叉反应率低于10%。本研究为建立快速检测食品中孔雀石绿残留的免疫分析方法奠定了基础。     

渗透胁迫对玉米内源ABA及PM H+ -ATPase活性影响

用－1．0MPa的PEG－Hoagland溶液对抗旱性较强的陕8413和抗旱性较差的陕8410玉米品进行胁迫处理，结果发现，胁迫处理会导致细胞内源脱落酸（ABA）含量和质膜（PM）H^ -ATPase活性发生明显的变化，无论是胁迫还是对照，陕8413玉米幼叶生长部位细胞内源ABA含量和PMH^ -ATPase活性均高于陕8410，但在胁迫条件下，这种差异更明显，对玉米幼苗24h连续胁迫处理，在多数情况下，细胞内源ABA含量和PMH^ -ATPase活性维持在一般水平（但较对照高），且两之间没有发现直接的相关性，但在胁迫2h处，细胞内源ABA含量出现峰值，此时PMH^ -ATPase活性则在较低水平，在胁迫4h处，PMH^ -ATPase活性表现出很高的峰值，而此时细胞内源ABA水平则相对较低，两在各自峰值处存在一定的负相关。     

莱茵衣藻硫胁迫相关microRNA检测及其靶基因分析

采用特异反转录引物,构建莱茵衣藻microRNA(miRNA)的cDNA文库.选用U4核仁小分子RNA(small nucleolar RNA,snoRNA)作为内参,用SYBR(R)green RT-PCR对3种与莱茵衣藻缺硫胁迫反应相关的miRNA进行检测,利用在线平台软件Web MicroRNAs Designer(WMD3)对miRNA靶基因进行预测.结果表明,在缺硫胁迫下,3种miRNA(miRNA1145.2、miRNA1146和miRNA1158)的表达水平均明显上调,与正常培养的莱茵衣藻表达miRNA的相对丰度比值分别为3.11、2.38和3.67.靶基因预测分析表明,miRNA1145.2能影响脂肪酸氧化反应,miRNA1146与辅酶Q代谢相关,miRNA1158可能参与磷酸戊糖途径调控.     

集胞藻缺氮驯化株的代谢组学分析

集胞藻Synechocystis sp. PCC6803是一种非固氮蓝藻,它是重要的模式生物,可作为实验室驯化的研究材料.实验室驯化是指生物为适应人工环境而改变其遗传性状的过程.为研究生物在胁迫环境下的适应机制,以缺氮胁迫为选择压力对野生型Synechocystis sp. PCC6803进行了长达615 d的实验室驯化,最终获得了8株缺氮驯化株.这些驯化株在缺氮条件下的比生长速率与对照株无显著差异.用气相色谱-质谱检测这些驯化株的代谢物,共检测到52种代谢物,主要为氨基酸、脂肪酸、糖类及其衍生物.根据代谢物的组成对这些藻株进行分层聚类分析,结果显示,藻株形成3个聚类,分别由比生长速率较高的驯化株、比生长速率较低的驯化株和对照株构成.实验表明,由相同方式得到的驯化株的代谢组不同,这些驯化株可能以不同的代谢模式来应对缺氮胁迫.     

雨生红球藻细胞类型转化影响因子的协同作用

将培养到营养生长对数期的雨生红球藻细胞转移到胁迫环境中,探讨胁迫因子对雨生红球藻细胞类型转化的影响及各影响因子间的协同作用。结果表明,氮胁迫能诱导雨生红球藻从绿色游动细胞转变成红色不动细胞,培养基中磷肋迫和醋酸钠刺激能大大加快这一转化的速率。同时,高pH值、高盐度和强心照均能促进雨生红球藻细胞类型的转化,高盐度和强光照对转化效率的影响存在协同效应。     

笔架山水厂水处理效果及其健康风险初步评价

对采用O3—BAC深度处理工艺的笔架山水厂运行效果进行了试验研究,建立了饮用水健康风险评价模型并对水厂原水和出厂水进行了饮水途径的健康风险评价。研究结果表明:笔架山水厂水处理效果较好,可以有效去除感官性状、浊度物质以及有机物,使微生物监测指标均达到了相应标准的要求,对浮游动物的平均去除率可达92.71%;健康风险评价结果显示,经过O3—BAC工艺处理后,饮用水通过饮水途径所致个人健康危害风险明显降低,致癌物Cr(Ⅵ)所产生的健康风险数量级为10-4,非致癌物产生的健康风险数量级为10-11～10-9。     

脊椎动物GnRH肽的分子多态性和功能

促性腺激素释放激素（GnRH）是在调控脊椎动物性腺发育和最后性成熟中起至关重要作用的一个保守神经十肽家族．从mGnRH被证实以来，已经从原索动物和脊椎动物神经组织中发现16种不同形式的GnRH肽．在已研究的脊椎动物中，cGnRH-Ⅱ肽在所有脊椎动物脑组织中存在并完全保守，然而发挥主要功能作用的一般都是在下丘脑和端脑中优势表达的种属特异性GnRH肽．与脑组织中存在多种类型GnRH肽相对应的是，在部分脊椎动物的垂体促性腺激素细胞膜上发现多种亚型的GnRH受体（GnRH—R）．GnRH基因或GnRH-R的缺失或突变将导致生物个体繁殖生理学功能出现异常或病变．根据这一原理，采用反义转基因技术，通过在脑水平控制鱼类性腺发育，已成功获得败育的转基因鲤鱼．采用该方法获得的转基因鱼在生态和遗传方面是安全的，将为转基因鱼的产业化提供一种新的技术保障．     

糖尿病鼠骨骼肌萎缩相关环状RNA的研究

骨骼肌萎缩是糖尿病患者中、晚期严重并发症之一,为研究其分子发病机制,利用链脲佐菌素诱导构建小鼠1型糖尿病模型,通过高通量测序技术,调查与糖尿病肌萎缩病变相关的环状核糖核酸（circular ribonucleic acid,circRNA）表达谱,并利用生物信息分析软件探究circRNA在糖尿病骨骼肌萎缩病变中的可能作用．结果显示,与正常同基因背景小鼠的同类组织相比,糖尿病鼠的腓肠肌呈现：(1)肌纤维面积明显减小,运动功能下降;(2)含有1 403个与1型糖尿病发生发展相关的差异表达circRNA,其中,690个上调和713个下调;(3)通过基因本体、京都基因和基因组百科全书的功能富集分析显示,差异表达的候选circRNA亲本基因主要富集于转录调节生物学过程、细胞质成分和蛋白质结合分子功能等方面,以及促分裂原活化蛋白激酶信号通路、泛素介导的蛋白降解、叉头盒蛋白O通路与糖尿病肌萎缩相关的信号通路等．通过数据库信息和生物信息分析技术,预测与肌萎缩基因MuRF1相结合的小RNA(mirco RNA,miRNA),并挖掘出可调控它们表达的功能circRNA,构建了circRNA-miRNA-m...     

莱茵衣藻CrDRBs基因的克隆和生物信息学分析

双链核糖核酸(ribonucleic acid,RNA)结合蛋白(double-stranded RNA-binding protein,DRB)是一类含有双链RNA结合结构域(dsRBD)的蛋白,在小核糖核酸(micro ribonucleic acid,microRNA或miRNA)的生物合成和作用方式选择方面起着重要作用.为获得莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii,C. reinhardtii)中所有CrDRBs的全长序列并进行生物信息学分析,从蛋白质功能结构域Pfam数据库中下载了dsRBD结构域模块,使用HMMER软件基于dsRBD检索C. reinhardtii全基因组序列,获得C. reinhardtii中4个含dsRBD结构域的CrDRB蛋白相关信息.抽提C. reinhardtii总RNA,反转录获得其cDNA,设计相应引物克隆获得其完整的基因ORF序列.设计实时荧光定量PCR引物,以actin基因为内参,分析C. reinhardtii各CrDRBs基因的相对表达.同源比对分析C. reinhardtii各CrDRBs蛋白的dsRBD序列.通过Phyre2软件在线预测其dsRBD的高级结构.将莱茵衣藻CrDRBs的dsRBD与拟南芥的5个DRB成员构建系统进化树分析,初步探讨分析莱茵衣藻CrDRBs各成员的的进化保守性.本研究共获得了4个莱茵衣藻双链RNA结合蛋白,均具有典型的dsRBD结构域,含有3个保守氨基酸.相比已报道的DUS16,其他3个CrDRBs的CDS序列较长,基因表达较高(除CrDRB2外).本研究为下一步揭示莱茵衣藻CrDRB在miRNA调控途径的功能奠定基础.