螺旋藻基因工程研究(I)--几种抗生素对钝顶螺旋藻的抑制效应

了建立螺旋藻外源基因表达体系，首先必须选择螺旋藻抗性基因。本实验选用三种抗生素进行敏感性研究，实验结果表明：螺旋藻对这三种抗生素的敏感性有明显差异，它们对螺旋藻生长的抑制作用依次为：氯雷素＞链霉素＞氨苄青霉素。氯霉素对螺旋藻生长的抑制作用与氯霉素的浓度和作用时间呈正相关。600mg/L氯霉素处理48h就对螺旋藻有明显的致死作用，致死率分别为：48h为17。51％、144h为68．67％；400mg/L的氯霉素：48h至死率为1．96％、144h为49．76％；200mg/L以下低浓度的氯霉素对螺旋藻的抑制作用需要较长时间，144h才具有明显的致死作用，致死率为19．24％。     

栅列藻蛋白质提取液促进人子宫颈癌细胞的生长研究

本文采用ＭＴＴ［３（４，５ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌ－２ｙｌ）－２，５ｄｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍｂｒｏｍｉｄｅ］快速微量比色技术发现斜生栅列藻（Ｓｃｅｎｅｄｅｓｍｕｓｏｂｌｉｑｕｕｓ）蛋白质提取液可促进动物细胞的生长．在０．５％胎牛血清（ＦＢＳ）的ＲＰＭＩ１６４０培养液中，加入９５μｇ／ｍｌ栅列藻提取液可使人子宫颈癌细胞（ＨｅＬａｃｅｌ）比对照组细胞增殖３倍左右．这种刺激动物细胞生长的活性物质分子量在３５００－８０００道尔顿（ｄａｌｔｏｎｓ）之间，经胰蛋白酶处理或高温处理后均失去活性     

人源性rhG-CSF单链抗体基因的克隆和表达

从构建的噬菌体表面展示文库中，筛选出全新的人源抗重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）特异单链抗体（ScFv）的噬菌体克隆。ScFv被克隆到pCANTAB 5E载体上，以E. coli TG1为宿主，进行噬菌体表面呈现，以rhG-CSF为靶抗原进行免疫亲和富集筛选，经酶联免疫吸附试验（ELISA）鉴定，得到一株高亲和力克隆。DNA序列分析表明，该ScFv基因全长733 bp，其中重链可变区（VH）为366 bp，轻链可变区（VL）为322 bp。抗rhG-CSF的ScFv在E. coli HB2151中以可溶形式分泌表达，产物主要分布于周质中，占周质总蛋白的质量分数为20%～25%，经免疫印迹试验（Western-blot）分析显示该单链抗体黏均分子量为31 kD。     

盐泽螺旋藻变种Fe—SOD的分离纯化及其分子特征

从盐泽螺旋藻变种(Spirulina subsalsa var. )中分离出Fe—SOD(含铁的超氧化物歧化酶),并研究了其分子特征。结果表明,这种藻类仅含Fe—SOD,无同功酶形式,分子量约35000道尔顿。酶分子为二聚体,两个亚基共用一个铁原子。     

氮,磷对盐藻生长及其β—胡萝卜素积累的影响

本文研究了盐生杜氏藻（Ｄｕｎａｌｉｅｌａｓａｌｉｎａ，系中国科学院海洋研究所赠送）在２６℃、３０００ｌｘ试验条件下，不同氮、磷浓度对其细胞生长与β－胡萝卜素积累的作用．分别提供ＫＮＯ３或ＫＨ２ＰＯ４时，对盐藻生长的最适浓度分别为氮１ｍｍｏｌ／Ｌ，磷０．３ｍｍｏｌ／ｌ．而对细胞个体积累β－胡萝卜素的最适条件是无氮、无磷，经１０ｄ生长，其β－胡萝卜素含量分别达１１．２４ｐｇ／ｃｅｌ和１０．２８ｐｇ／ｃｅｌ．本文还讨论了以上结果的机理及意义，为建立盐藻高产β－胡萝卜素的控制模式提供了重要理论依据．     

螺旋藻基因克隆研究进展

螺旋藻是一种具有重要经济价值和开发前景的原核生物，许多国家已相继建立了螺旋藻的大规模工业生产系统，我国在90年代一跃而成为世界第一生产大国、当前，加强螺旋藻基因工程的研究，对进一步提高其天然产物表达和开创以螺旋藻作为表达载体，建立基因工程新的高效原核光合表达系统日渐迫切。由于螺旋藻的遗传背景尚不清楚，其基因工程尚难突破。本文仅对有关的螺旋藻基因克隆研究进行了阐述和展望，以期为推进螺旋藻基因工程研究提供参考。     

藻蓝蛋白的抗癌活性研究

活细胞脱氢酶催化四唑盐(MTT)还原,生成溶于有机溶剂的蓝色甲臜结晶,可定量反映细胞生长．流式细胞技术可根据细胞中DNA的质量分数来检测其所处的细胞周期．采用上述两种方法,研究了藻蓝蛋白(PC)对HeLa细胞的抗癌活性．实验证明,PC对HeLa细胞生长有明显的抑制作用,当PC浓度为80mg／L时对癌细胞的抑制率达31．O％．初步认为这种抑制机理为：PC使HeLa细胞由合成期(S)或分裂期(M)向G1期转变和积集,细胞DNA合成衰减．     

磁处理对番茄幼苗MDH合成的影响

经磁处理的番茄(Lycopersicon esculeutum mill)幼苗苹果酸脱氢酶(malate dehydrogenase,MDH)活性增高,同工酶谱发生变化,出现新谱带．加放线菌素D(actinomycin D,AMD)后磁处理同工酶带中的新带消失,表明磁处理可能改变了基因表达的调控．而加AMD的磁处理组酶活仍高于相应的对照组,推测磁处理有可能对幼苗体内已有的MDH有活化作用．     

C_(60)对DNA光动力学作用的FT-Raman光谱研究

采用傅里叶变换激光Ｒａｍａｎ光谱术从分子水平研究了富勒烯Ｃ６０对小牛胸腺ＤＮＡ的光动力学作用。结果表明光激发Ｃ６０对ＤＮＡ各组分基团均有不同程度的损伤，其中ＤＮＡ的空间构像破坏显著，腺嘌呤次之，骨架磷酸基团、脱氧核糖、嘧啶环等也遭到破坏并导致ＤＮＡ链断裂。这种结果并非由于Ｃ６０与ＤＮＡ分子之间直接的电子相互作用，而是通过单线态氧（１Ｏ２）或·ＯＨ，Ｏ２·－等多自由基作用所致     

鞭枝藻与其突变体提取液对人膀胱癌细胞生长的影响

本文以EMS(乙基甲烷磺酸盐,Sigma)诱变嗜温的层理鞭枝藻(Mastigocladus laminosus),并经9T24C人膀胱癌细胞生长选择获得突变体。在0.3％FBS(胎牛血清) DME/F12培养液中加入100μg/ml层理鞭枝藻突变体提取液可促进9T24C癌细胞数在6天中增长3.1倍,而在同样条件下野生型层理鞭枝藻的提取液则对9T24C癌细胞无明显刺激生长作用。这种未知的刺激癌细胞生长的活性物质分子量>3500。