β-咔啉类杂环胺模型体系反应产物相关性质的研究

为深入了解美拉德反应与其伴生危害物之间的关系,以色氨酸、葡萄糖和肌酐为反应底物建立β-咔啉类杂环胺美拉德反应模型体系,在160、180、200℃条件下分别反应不同时间,分析各体系β-咔啉类杂环胺及理化指标的变化规律并对其进行相关性分析。结果表明:随着反应时间延长和反应温度升高,β-咔啉类杂环胺Norharman和Harman生成量增加,体系pH值、中间产物和最终产物类黑精生成量均呈上升趋势,各体系挥发性物质种类及含量均增加,以吡嗪类物质为主,反应产物抗氧化活性则呈波动性变化。β-咔啉类杂环胺模型体系杂环胺生成量与体系pH值、中间产物生成量和终产物类黑精生成量呈极显著正相关,与体系DPPH自由基清除能力和铁离子还原力(FRAP)没有相关性。研究结果为调节杂环胺生成量与食品美拉德体系品质提供研究思路。     

压痕残余应力对氮化硅基复合材料阻力曲线行为的影响

通过压痕小裂纹直接量测法获得了ＴｉＣ，ＴｉＮ／Ｓｉ３Ｎ４复合材料的阻力曲线，采用更具合理性的指数经验公式拟合处理实验数据，初步探讨了Ｋ∞，Ｋ＾＊Ｒ，ΔＣ，等参数的物理意义。对压痕残余应力消除前 实验结果进行比较，发现压痕残余应力的消除，提高了材料的极限断裂韧性值Ｋ＾＊Ｒ，却大大减少了裂纹稳态生长的容限，使得材料的脆性行为更为突出。     

花生球蛋白鼠源多克隆抗体的制备及免疫学特性鉴定

为建立花生球蛋白致敏原的免疫学快速检测方法,采用碱溶酸沉法提取花生球蛋白,经SDS-PAGE检测蛋白纯度后,免疫5只6～8周龄的Balb/c雌性小鼠制备花生球蛋白鼠源多克隆抗体(多抗)血清,并进行免疫学特性鉴定。结果表明：免疫结束后得到的5个多抗血清效价均在1∶51 200以上,均具有一定的敏感性,其中2号小鼠的多抗血清敏感性较好,半数抑制浓度为320 ng/mL;制备的多抗血清特异性较强,2号小鼠的多抗血清与伴花生球蛋白、大豆球蛋白、β-伴大豆球蛋白、牛血清白蛋白、麦朊蛋白、乳清蛋白的交叉反应率均较低,在0.5%以下;Western blot鉴定结果表明成功制备出了花生球蛋白鼠源多克隆抗体。综上,获得了效价高、敏感性强、特异性优良的花生球蛋白鼠源多克隆抗体,为其单克隆抗体的制备及免疫学快速检测方法研究奠定了基础。     

热处理大豆球蛋白的体外消化稳定性

为了有效评估大豆球蛋白抗原性变化,对热处理后的大豆球蛋白进行体外模拟消化实验,考察其体外消化稳定性。首先采用碱溶酸沉法从脱脂大豆粉中提取大豆球蛋白,然后将其经400 MPa超高静压处理15 min后进行加热（70、90、110、130℃）处理20 min,然后进行体外模拟消化实验,采用SDS-PAGE、邻苯二甲醛（OPA）法和间接竞争酶联免疫（ELISA）法研究消化过程中大豆球蛋白的蛋白质分子质量、水解度和抗原性的变化。结果表明：经体外模拟消化实验后,与未处理样品相比,不同温度热处理后大豆球蛋白的蛋白质条带逐渐变浅,生成更多的小分子蛋白;在胃消化过程中,未处理和热处理大豆球蛋白的水解度逐渐增强,在肠消化过程中,经过90、110、130℃热处理的大豆球蛋白水解度总体先增加后降低;与未处理的大豆球蛋白相比,热处理大豆球蛋白经过胃肠消化后抗原抑制率显著下降,最低可从87%降至4%。大豆球蛋白经过热处理,通过胃肠消化后可显著降低其抗原性。     

大豆中主要过敏原的研究现状和展望

大豆是引起食物过敏最常见的过敏原食物之一。该文重点介绍了大豆中主要过敏原Gly m Bd 30K、Gly m Bd 28K和Gly m Bd 60K的研究现状和展望。     

大豆致敏原β-伴大豆球蛋白α’亚基的分段与克隆鉴定

大豆是引起人们食物过敏的八大过敏原之一,β-伴大豆球蛋白是大豆主要致敏蛋白之一,并且3个亚基α、α’、β都具有致敏性。利用生物信息学软件对β-伴大豆球蛋白α’亚基进行Overlapping(重叠)分段,通过PCR技术扩增到目的片段,与pMD 18-T载体连接;对重组质粒进行PCR和双酶切鉴定,鉴定结果与基因序列一致,成功构建克隆载体。     

β-伴大豆球蛋白多克隆抗体的制备及纯化前后免疫学特性鉴定

以β-伴大豆球蛋白免疫新西兰兔,制备抗β-伴大豆球蛋白多克隆抗体。利用正辛酸-硫酸铵沉淀法纯化多抗血清,并分析纯化前后多抗血清蛋白含量、纯度、效价、敏感性及特异性。结果表明,经聚丙烯酰胺凝胶电泳分析纯化后血清纯度得到提高;间接ELISA法检测多抗血清效价及敏感性无明显变化;与大豆Gly m Bd 28K蛋白和花生蛋白的交叉反应率分别由25.28%、1.16%降至为0.79%、0.2%。制得的抗β-伴大豆球蛋白多克隆抗体特异性高。为β-伴大豆球蛋白致敏蛋白的检测,和大豆β-伴大豆球蛋白致敏亚分子结构的定位奠定了基础。     

大豆主要过敏原Gly m Bd 28K的同源建模和B细胞表位的预测

利用生物信息学软件SWISS-MODEL和Deep View 4.1对Gly m Bd 28K进行同源建模并对做出的模型进行评估。利用DNAStar和SOPMA分析Gly m Bd 28K的亲水性、柔韧性、表面可及性、抗原指数和二级结构,预测出Gly m Bd 28K的4个B细胞线性表位5-13,75-77,175-177,200-203。根据三级结构模型,通过Disco Tope 2.0预测出Gly m Bd 28K的6个与构象表位相关的区段11-14,40-41,43,114-115,185-192,194-207。     

2,4-二氯苯氧乙酸人工抗原合成及鼠源多克隆抗血清的制备

采用碳化二亚胺法(EDC法)将2,4-D与牛血清白蛋白(BSA)及卵清蛋白(OVA)偶联,合成免疫原2,4-D-BSA和包被原2,4-D-OVA,采用紫外扫描(UV)和聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法进行鉴定;用2,4-D人工免疫抗原(2,4-D-BSA)免疫BALB/c纯系小鼠,采用间接ELISA测定多抗血清效价、阻断ELISA鉴定其抑制。结果表明:BSA与2,4-D偶联后,波峰出现右移,表明偶联成功;SDS-PAGE电泳中BSA的泳动速度大于2,4-D-BSA,表明2,4-D已与BSA成功偶联;6只小鼠血清效价均达到了1:1.28×104,且1号小鼠多抗血清敏感性最好,半数抑制IC50为72.48ng/mL,表明成功获得了高效价、特异性好、亲和力较高的鼠源抗2,4-D多克隆抗体血清,为2,4-D残留免疫学检测方法的建立奠定了良好的基础。     

大豆主要过敏原Gly m Bd 28K的分离纯化及多抗血清的制备

该文从脱脂大豆粉中分离纯化28K(Gly m Bd 28K)蛋白,并制备多抗血清。方法用碱溶酸提法提取28K蛋白,盐析法制得28K粗蛋白,DEAE–Sepharose CL–6B层析纯化28K蛋白,SDS–聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白的纯度,制备兔抗血清,用间接ELISA法检测效价。该实验纯化出28K蛋白,制备了抗28K的多抗血清,效价为1∶51200。为研究大豆主要过敏原蛋白28K的单克隆抗体制备及28K的Ig G结合表位的确定奠定了基础。