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1.
目的制备抗DNA单克隆抗体,用以建立特异、灵敏、简便的外源性DNA残留量测定方法。方法将小牛胸腺DNA与阳离子化的牛血清白蛋白通过Mannich反应连接成为完全抗原,免疫BALB/c小鼠得到的脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,获得稳定分泌抗DNA单抗的杂交瘤细胞株,对抗体进行纯化、浓缩及鉴定。结果得到3株可稳定分泌抗DNA单抗的杂交瘤细胞株,单抗的ELISA间接效价分别为1∶4×103、1∶8×104和1∶1×103;亚型分别为IgM/κ、IgM/λ和IgM/κ;亲和力常数分别为3.96×108、4.04×109和1.26×108L/mol;3株细胞分泌的单抗与ctDNA、DH5αDNA、GS115DNA和H.S.DNA均有较高的结合能力,而对RNA、BSA和酪蛋白结合较弱或不能结合;3株细胞分泌的单抗识别3个不同的抗原表位;可检出4ng/ml以上的DNA。结论成功制备了3株细胞分泌的抗DNA单抗,为外源性DNA残留量免疫测定方法的深入研究奠定了基础。  相似文献   
2.
由北京科兴生物制品有限公司研制的SARS灭活疫苗已于2004年12月在中日友好医院完成随机、双盲对照的Ⅰ期临床研究,取得了较好的预期结果。同时WHO对我国的SARS疫苗临床研究进展非常重视和关心,为此,由WHO疫苗基础研究部(IVR)主持的我国SARS疫苗Ⅰ期临床研究总结和Ⅱ期临床研究方案国际专项讨论会于2005年6月1日在日内瓦WHO总部M220会议室召开。会议由WHO IVR负责人Marie-Paule Kieny教授主持,参加会议的有WHO和特邀专家7人,中国药品生物制品检定所王军志副所长、董关木主任作为WHO的特邀专家参加了会议,北京科兴生物制品有限公司王楠、高虹博士出席会议。  相似文献   
3.
目的制备重组水蛭素(Hirudin)生物学活性检测参考品,并标定其生物学活性。方法按照WHO相关规定制备、分装和冻干参考品,经全面检测合格,用TH生色底物法进行体外生物学活性检测。结果外观、无菌试验合格,水分含量为0.8%。经过10次标定,平均生物学活性为12 701 ATU/支,标准差为2 226 ATU/支,变异系数为17.5%。在-20℃、4℃和25℃条件下,生物学活性可以稳定保持9个月。结论该批重组水蛭素各项指标均符合要求,性质稳定,可作为国家参考品,用于重组水蛭素的生物学活性检测。  相似文献   
4.
毛细管SDS无胶筛分电泳测定小分子多肽相对分子质量   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的建立快速毛细管SDS无胶筛分电泳法(SDS-NGS),测定小分子多肽相对分子质量。方法涂层毛细管(管长30cm,内径100μm);分离电压为9kV(300V/cm),分离温度为20℃;检测波长为214nm,检测时间为18min;所用SDS-多肽相对分子质量标准范围为2 512~16 949;以橙G(OG)为内标参照物。结果在相对分子质量2512~16949范围内,多肽相对分子质量的对数与其相对迁移率具有良好的线性关系(r=0.996);应用该方法测定了重组人奈西立肽、重组人表皮生长因子、虎纹镇痛肽、重组人心钠肽4种重组小分子多肽的相对分子质量,所测结果变异系数CV均小于3%。结论毛细管SDS无胶筛分电泳方便快速,灵敏度高,重现性好,结果准确,可作为小分子多肽相对分子质量的检测方法。  相似文献   
5.
通过泡沫剂的筛选及评价,研制出起泡能力强,稳定性好的耐高温泡沫剂DHF-1。经过300℃,72 h耐温性试验,结果表明其化学性能稳定,对蒸汽驱具有良好的封堵调剖能力,且在残余油条件下,仍然能够起到封堵调剖作用。在孤岛中二区27-531井进行了单井注蒸汽加氮气及高温泡沫剂试验,共注入氮气1.1×105m3,蒸汽2×103t,高温泡沫剂7 t,日产油由实验前的0.8 t.d-1,上升到17 t.d-1左右,含水率由实验前的98.3%下降到52%,达到预期效果。  相似文献   
6.
目的建立搭载2型人成纤维细胞生长因子(human fibroblast growth factor 2,h FGF2)重组F基因缺失型仙台病毒(Sendai virus,Se V)制剂(Se V-h FGF2/d F)的质控方法与质量标准。方法采用RT-PCR法对Se V载体中插入的目的基因h FGF2和缺失的F基因进行鉴别,同时扩增两个基因片段M-HN和h FGF2-NP,以鉴别该病毒;鸡红细胞凝集试验检测制品的血凝效价,并计算病毒颗粒数;免疫荧光法测定Se V-h FGF2/d F的感染滴度,结合病毒颗粒数计算其比滴度;Se V-h FGF2/d F体外感染COS7细胞后,ELISA法测定感染上清中h FGF2的表达量;将感染上清体外作用于BALB/c 3T3细胞,3T3细胞增殖法检测h FGF2的生物学活性;酚-氯仿法抽提样品的DNA,Pico-Green法测定制品中DNA残留量;PCR法检测腺病毒残留。结果重组Se V-h FGF2/d F基因组中h FGF2基因、F基因、M-HN片段和h FGF2-NP片段的RT-PCR鉴定结果与理论值相符;血凝效价为1∶512,病毒颗粒数为4.12×1010 VP/ml;感染滴度为2.06×109 CIU/ml,比滴度为5.0%;Se V-h FGF2/d F以MOI 10感染COS7细胞72 h后,ELISA检测上清中h FGF2的表达量为117.1 ng/ml;表达上清中h FGF2的生物学活性为437 IU/ml;DNA残留量为2.24 ng/ml;制品中腺病毒的PCR检测结果为阴性;其他各项指标均符合《人基因治疗研究和制剂质量控制技术指导原则》及《中国药典》三部(2010版)要求。结论初步建立了Se V-h FGF2/d F的质控方法和质量标准,为保证该制品的安全、有效、质量可控奠定了基础,同时也为其他Se V载体基因治疗药物的质量控制提供了参考。  相似文献   
7.
目的设计具有更高生物学活性的睫状神经营养因子突变体,并对其进行表达、纯化及生物学活性检测。方法以计算机分子模拟系统设计突变体,重叠延伸PCR方法获得突变体的编码区DNA序列,克隆入表达载体pThioHisA,转化E.coliBL21,以IPTG诱导表达。复性纯化后,用鸡胚背根神经节无血清培养法和小鼠减重法进行生物学活性测定。结果目的蛋白以包涵体形式存在,表达量在35%以上,纯化后的纯度达95%以上,能有效地促进鸡胚背根神经节的生长,并能使正常小鼠的体重降低,脂肪指数下降。结论所设计的突变体经表达及纯化后,具有良好的生物学活性,为进一步研究突变体蛋白的促神经生长和减肥作用奠定了基础。  相似文献   
8.
目的建立测定流感疫苗血凝素(Haemagglutinin,HA)含量的替代方法 ,并进行验证,以解决大流行流感发生初期疫苗原液中HA定量的难题。方法优化糖苷酶处理条件,将流感疫苗原液经糖苷酶处理后,以还原SDS-PAGE方法分离样品,以灰度扫描法确定HA蛋白百分比,结合样品总蛋白数值,计算样品中HA含量。以该方法和传统的单向免疫扩散(SRID)法分别测定7批流感疫苗原液中HA含量,并进行比较。结果优化的糖苷酶处理条件为:总蛋白400μg/ml,PNGaseF加入比例为1:50。样品经糖苷酶处理后,以还原SDS-PAGE法可以清晰区分各蛋白条带,经测序后确定HA两个亚基,与预期相对分子质量一致。该方法测定7批流感疫苗原液中HA含量的结果与SRID法测定结果的符合率在87.90%~122.20%之间。结论初步建立了测定流感疫苗中HA含量的替代方法 ,在WHO参考品供应不到位时,可用于大流感发生时疫苗原液中HA之定量。  相似文献   
9.
目前,电力行业的设备制造周期越来越短,从中标到交货期时间比较紧张,造成一些企业都不能按时交货,严重影响了企业的信誉。如果成套设备厂家不能按计划进入市场,罪魁祸首往往是生产上的延误。延误生产的因素很多,但从本质上讲,有一些极为重要的因素并不是技术方面的。一个主要的因素是目前在采购元件的过程,如果成套设备厂家只是重视技术和选择供应商,忽视对元件的购买安排,实际上他们只解决了整个问题的一小部分。  相似文献   
10.
重组人CTAL4-Ig活性测定参考品的制备及标定   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 建立用于效价测定的重组人CTAL4 Ig参考品。方法 按WHO标准品有关要求制备参考品 ,分装、冻干后进行检测 ,采用Raji细胞体外活性测定法进行标定。结果 冻干重组人CTAL4 Ig参考品经检测外观、无菌实验合格 ,水分为 2 2 % ,经 10次标定活性值位于 336~ 4 6 3U/支 ,平均值为 4 19U/支 ,10次结果的标准差为36 0 3U/支 ,变异系数为 8 6 1% ,加速热稳定实验表明其生物学活性在 - 2 0℃、4℃和 2 5℃下 12个月保持稳定。结论 该批重组人CTAL4 Ig活性参考品各项指标均符合标准品的要求 ,效价定为 4 0 0AU/支 ,编号为 2 0 0 2 /0 1。  相似文献   
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