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目的构建口蹄疫病毒(FMDV)2B基因绿色荧光蛋白(GFP)融合表达质粒,并在BHK-21细胞中表达。方法RT-PCR扩增O型口蹄疫病毒WFL株的2B基因,克隆入表达载体pEGFP-C1,并进行双酶切、PCR及测序鉴定。将阳性重组质粒转染BHK-21细胞,检测绿色荧光蛋白的表达和2B基因转录水平。结果经双酶切及PCR鉴定,目的基因片段大小与预期相符,测序结果与WFL株相应序列一致。荧光显微镜和流式细胞仪均检测到细胞内绿色荧光蛋白的表达,荧光定量PCR检测到细胞内有2B基因的转录。结论已成功构建了FMDV2B基因GFP融合表达质粒,并在BHK-21细胞中获得了表达。 相似文献
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蓖麻毒素和相思子毒素蛋白质芯片检测方法的建立 总被引:1,自引:1,他引:0
目的建立蓖麻毒素和相思子毒素蛋白质芯片检测方法。方法制备并纯化蓖麻毒素和相思子毒素单克隆抗体。采用竞争免疫法检测抗原,建立检测蓖麻毒素和相思子毒素的蛋白质芯片检测方法。应用蛋白质芯片检测两种毒素的模拟样品。结果应用蛋白质芯片检测蓖麻毒素、相思子毒素和两种毒素混合的模拟样品时,在其相应区域均没有荧光信号,结果为阳性,与实验设计相符。结论已成功建立了蓖麻毒素和相思子毒素蛋白质芯片检测方法,该方法具有广阔的应用前景。 相似文献
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白细胞介素-10是一种具有多种生物学功能的细胞因子,在疾病的治疗及诊断中具有重要的作用。本文对白细胞介素-10的分子结构特点、在感染性疾病中的作用及其临床应用作一综述。 相似文献
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目的克隆并原核表达羊布氏菌强毒株16M vjbR基因。方法 PCR扩增羊布氏杆菌16M株vjbR基因,亚克隆至原核表达载体pET-28a中,构建重组原核表达质粒pET-28a-vjbR,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经His Trap FF纯化后,进行Western blot分析。结果扩增的vjbR基因大小为708 bp,与预期一致;重组原核表达质粒pET-28a-vjbR经双酶切及测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为29 000,诱导4 h表达量可达6.84 mg/ml;纯化的重组蛋白纯度为65.7%,能被羊布氏杆菌阳性血清所识别。结论成功在大肠杆菌中表达了羊布氏菌VJBR蛋白,为其功能的研究、羊布病诊断试剂盒的研制及亚单位疫苗的研发奠定了基础。 相似文献
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