耐热纤维素酶产生菌的筛选、鉴定及产酶条件优化

从温泉热源地区采集的大量泥土和水样中，筛选出一株在60℃生长的纤维素酶产生菌SH2。结合菌株的生理生化特性分析与Biolog微生物自动鉴定仪的鉴定结果，命名为热葡糖苷酶地芽孢杆菌（Geobacillus thermoglucosidasius）SH2，该菌株兼性好氧，在45～60℃能较好地生长。对菌体生长与产酶培养条件优化表明：初始pH值为5．5，碳、氮源分别为蔗糖和玉米浆时有利于产酶，经48h发酵后纤维素酶酶活达0．36IU／mL。纤维素酶反应条件研究表明，该纤维素酶的最适pH值为6．0，在pH4．0～10．0范围具有较强的耐受性；在45～65℃间酶活差异仅在5％之内，显示了很好的温度耐受性。  

耐盐节杆菌Arthrobacter pascens DMDC12中Mn-SOD的纯化及性质

作者从自行分离的高度耐盐菌Arthrobacter pascens DMDC12中分离提取超氧化物歧化酶(SOD),粗酶液经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sapharose FF及Source 15Q柱层析,获得了电泳纯的SOD.其亚基相对分子质量23 300,比活力为2 183 U/mg,纯化倍数为53,回收率51%.根据SOD同功酶对抑制剂氯仿:乙醇和H2O2的敏感性,判断其为Mn-SOD.金属离子Mg2 、Zn2 、Ba2 、Cu2 对酶产生一定抑制,Fe2 对酶产生显著的抑制,0.5 mmol/L的Mn2 对酶有激活作用,进一步证实该酶为Mn-SOD.该酶在45℃以下、pH 5～9范围内显示较好的稳定性.相关研究进一步验证了极端微生物是Mn-SOD的重要酶源.  

耐有机溶剂脂肪酶产生菌的筛选及其酶学性质

以体积分数10%的甲苯等有机溶剂为筛选压力,从油污和污水等样品中筛选到一株产耐有机溶剂脂肪酶的有机溶剂耐受茵LX1,经16 S rDNA序列分析,该菌株鉴定为Pseudomonas aeruginosa.研究发现菌株LX1所产脂肪酶最适反应pH和温度分别为7.0和40℃,在较宽的pH范围内(6.5～10.5)具有较高的稳定性;金属离子鏊合剂EDTA和Ba~(2+)、Ca~(2+)对LX1脂肪酶活力均有明显的激活作用,推测该脂肪酶为金属激活酶.LX1脂肪酶在体积分数25%的疏水性和亲水性有机溶剂中均具有较好的耐受性,在十六烷、十四烷、十二烷、正庚醇、正辛醇和正己醇体系中半衰期显著延长到10 d以上,在DMF和DMSO体系中的半袁期为5 d以上,均高于在无溶剂体系中的半衰期.展现了LX1脂肪酶在有机相生物催化中的良好应用前景.  

ARTP诱变选育高温蛋白酶高产菌株及其酶学性质研究

以高温环境土样中筛选的产高温蛋白酶菌为出发菌株,利用常压室温等离子体诱变技术选育出一株高产突变株Bacillus licheniformis TP1-5,产酶活力达到33200U/m L,为出发菌株的1.56倍。通过乙醇沉淀和阴离子交换层析两步纯化,获得电泳纯的高温蛋白酶。酶学性质研究表明,该蛋白酶为高温碱性丝氨酸蛋白酶,酶的最适p H为10.0,最适反应温度为60℃,具有较好的p H稳定性和热稳定性;对离子型和非离子型表面活性剂均具有很高的耐受性,为进一步开发应用奠定了基础。  

组成型纤维素酶高产菌的筛选及产酶条件优化

从富含植物纤维素的土样中筛选得到一株组成型纤维素酶产生茵LC-9,结合Biolog微生物自动鉴定仪和16S rDNA序列分析,该茵株鉴定为Bacillus subtilis.通过发酵与产酶条件优化,确定了菌株最佳培养条件.在优化条件下发酵35 h后,内切纤维素酶活力可达1 301.4U/ml,,木聚糖酶活力可达289.2 U/mL.该菌株产酶发酵周期短,无需纤维素类物质的诱导,推测为一株新型组成型多功能纤维素酶高产菌株.  

甲酸脱氢酶基因在大肠杆菌Rosetta中的高效表达

甲酸脱氢酶是氧化还原酶辅酶NAD(P)~+和NAD(P)H再生循环体系中的关键酶。实验中,用PCR方法扩增了假丝酵母Candida boidinii中甲酸脱氢酶基因(fdh),分别构建了诱导型表达载体pUC-dh和pET- fdh,以E.coli Rosetta为表达宿主,获得了能够高效表达甲酸脱氢酶的重组菌。经诱导后重组菌Rosetta/pET- fdh的FDH比酶活为0.399U/mg(蛋白),Rosetta/pUC-fdh的FDH比酶活为0.163U/mg(蛋白)。经SDS- PAGE分析,Rosetta/pET-fdh和Rosetta/pUC-fdh表达的FDH蛋白分别占菌体可溶性总蛋白的17%和10%,实现了fdh基因在Rosetta中的高效表达。研究中所构建的重组菌为氧化还原反应中的辅酶再生奠定了良好的基础。  

枯草芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶基因的克隆及高效表达

扩增了枯草芽孢杆菌中的葡萄糖脱氢酶基因（gdh）,构建了诱导型表达载体pET-gdh,导入E.coliBL21（DE3）后获得了高效表达葡萄糖脱氢酶基因的重组菌BL21/pET-gdh。经过诱导时间、诱导温度参数的优化,IPTG诱导后重组菌BL21/pET-gdh的葡萄糖脱氢酶比酶活高达9.65 U/mg蛋白,SDS-PAGE电泳分析表明,重组蛋白质表达量占全菌胞内可溶性蛋白的53%,实现了葡萄糖脱氢酶基因的高效表达,为氧化还原酶催化系统提供高效率的NADP＋与NADPH循环奠定了基础。  

脂肪酶催化淀粉糖油酸酯的合成

研究了以淀粉糖(葡萄糖或麦芽糖)和油酸为原料,在固定化脂肪酶的催化下合成淀粉糖油酯的反应。通过对反应影响因素的考查,表明合成淀粉糖油酸酯的最适宜条件为:当淀粉糖:油酸为1∶1.5(物质的量比),脂肪酶Novozym435的用量为0.36 g/mol油酸,丙酮用量分别为20 mL/mol葡萄糖(10 mL/mol麦芽糖),加热回流反应分别为42 h(葡萄糖油酸酯)和72 h(麦芽糖油酸酯)时,油酸的转化率分别为93%和83%。表面张力测定显示,当葡萄糖油酸酯水溶液的浓度为7.0×10-4mol.L-1时,表面张力为32 mN.m-1;麦芽糖油酸酯水溶液浓度为5.0×10-5mol.L-1时,表面张力为31 mN.m-1。  

大肠杆菌蛋白质分泌机理及其重组蛋白分泌表达新进展

大肠杆菌是表达重组蛋白运用最广泛的宿主之一。异源蛋白在大肠杆菌中的表达往往会形成不溶性的包涵体;表达蛋白如果分泌至周质甚至胞外,不仅能够正确折叠,而且能简化后续的纯化;信号肽在蛋白分泌的过程中起关键作用,本文综述了大肠杆菌的跨膜转运途径与基本分泌系统,阐述了信号肽的结构与序列对重组蛋白分泌能力的影响,以及提高重组蛋白分泌能力的有效策略,总结了大肠杆菌系统成功实现重组蛋白分泌表达的新进展,为工业酶制剂及蛋白质药物相关技术的发展提供指导。  

麦芽糖醇棕榈酸酯的酶催化合成及其表面活性

以脂肪酶为催化剂,以麦芽糖醇和棕榈酸为原料合成了麦芽糖醇棕榈酸酯。通过考察原料配比、催化剂的用量、反应时间、溶剂的用量等主要因素对反应的影响,确定了反应的最佳条件。实验结果表明,以脂肪酶Novozym435为催化剂,脂肪酶的用量为0.24g/mmol棕榈酸,溶剂丙酮的用量与棕榈酸的比为10mL/mmol,麦芽糖醇∶棕榈酸为2.0∶1.0,在60℃下反应80h,棕榈酸的转化率为91.2%。麦芽糖醇棕榈酸酯的最小表面张力低于40mN/m,临界胶束浓度低于0.06%,具有良好的表面活性。