鲨鱼鱼皮、鱼骨胶原蛋白的纯化及其特性的初步研究

胶原蛋白有许多优良性质且用途广泛。水产动物下脚料如皮、骨、鳍等含丰富的胶原蛋白。本文研究了灰星鲨鱼皮、骨胶原蛋白的提取及纯化方法。SDS-PAGE电泳分析结果显示,所提取的胶原蛋白纯度均较高。通过酶解性质的研究发现:灰星鲨鱼皮、骨胶原蛋白均可被胰蛋白酶和蛋白酶K水解,水解产物相对分子质量大小各异,成分复杂。酶解蛋白图谱结果提示:鲨鱼皮、骨胶原蛋白一级结构相近。氨基酸组成分析表明,灰星鲨鱼皮及骨胶原蛋白中,甘氨酸含量最高,其余依次是丙氨酸、谷氨酸和精氨酸。  

蟹类主要过敏原的模拟肠胃液消化及其对过敏原活性的影响

目的:通过模拟肠胃液消化试验,分析锯缘青蟹肌肉中过敏原(原肌球蛋白)的消化特性以及消化对过敏蛋白致敏性的影响.方法:采用美国药典提供的模拟胃、肠液配方,测定青蟹原肌球蛋白和肌原纤维蛋白在体外模拟肠胃环境中的消化稳定性.以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹法(Western-blot)进行分析.结果:在模拟胃液反应中,非过敏原蛋白尤其是肌球蛋白重链和肌动蛋白等被胃蛋白酶快速降解,而原肌球蛋白在60 min时仍未被完全分解.在模拟肠液反应中,相对于致敏蛋白,肌球蛋白重链、肌动蛋白等非过敏蛋白在较短的时间内被分解,原肌球蛋白尽管120 min后几乎被完全分解,但会产生一些较稳定的蛋白降解片段.以免疫印迹法检测过敏患者血清,结果分子质量为34 kDa的原肌球蛋白降解产物仍具有过敏原性.结论:蟹类过敏蛋白相对于非过敏蛋白具有较高的消化稳定性,而且其高分子质量降解产物仍可能引起过敏反应.  

鱼骨胶原蛋白的纯化及其特性的初步研究

本文研究了鲨鱼、鲢鱼、草鱼和罗非鱼鱼骨胶原蛋白的纯化方法并对其特性进行了初步研究.SDS-PAGE电泳结果表明,所提取的四种胶原蛋白纯度均较高,相比之下,鲨鱼骨胶原蛋白纯度最高.通过蛋白酶解研究发现,四种鱼鱼骨胶原蛋白均可被胰蛋白酶和蛋白酶K水解,水解产物分予量大小各异,成分复杂.酶解蛋白图谱结果表明,不同鱼种鱼骨胶原蛋白酶解后的电泳图谱有一定差异.鱼品种越接近,提取的骨胶原蛋白酶解后的电泳图谱差异越小;反之,鱼品种差异越大,骨胶原蛋白酶解后的电泳图谱差异也越大.氨基酸组成分析表明,鲨鱼和鲢鱼骨胶原蛋白中,甘氨酸含量最丰富,依次是丙氨酸、谷氨酸和精氨酸.  

鲢鱼肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶的研究

本文研究了白鲢鱼肌肉中肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(myofibril-bound serine proteinase，MBSP)的作用。SDS-PAGE结果显示肌原纤维在55～60℃下加热后肌球蛋白重链有明显的分解现象。长时间加热也导敛α-辅肌动蛋白，肌动蛋白和原肌球蛋白的分解。此结果表明鲢鱼肌肉中存在肌原纤维结合型蛋白酶。丝氨酸蛋白酶抑制剂(Pefabloc SC和利马豆胰蛋白酶抑制剂)及金属蛋白酶抑制剂EDTA有效抑制了肌球蛋白重链的分解，而其它酶类的抑制剂小产生任何作用，提示该酶为需金属离子激活的肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶。  

水产食品中组胺的丹磺酰氯柱前衍生反相高效液相色谱测定方法的建立及应用

建立一种快速测定水产食品中组胺的丹磺酰氯柱前衍生反相高效液相色谱方法。该方法中样品经三氯乙酸 提取、丹磺酰氯衍生，C18反相色谱柱分离，以70%乙腈和30%超纯水为流动相进行等度洗脱，254 nm波长处紫外检 测。结果显示，组胺保留时间为5.5 min，组胺在1～500 μg/mL范围内线性系数为0.999 9，仪器检出限（RSN=3）为 0.5 μg/mL，定量限（RSN=10）为1.0 μg/mL，且重复性良好；采用该方法测定了16 种水产品和19 种水产加工食品中 的组胺，结果显示含量在0～682.22 mg/kg之间；样品添加不同质量浓度组胺的回收率为89.54%～101.92%。结果表 明，该方法快速准确、灵敏度高、重复性好，适用于水产食品中组胺的测定。采用该方法检测了鲣鱼、鲭鱼和蓝圆 鲹在不同温度条件下的组胺变化情况，结果发现，3 种鱼在低温贮藏条件下的组胺含量明显低于高温贮藏条件下的 含量，表明低温贮藏可有效抑制组胺产生。  

鱼皮明胶蛋白对淡水鱼糜凝胶特性的影响

为了高效利用丰富的淡水鱼资源,提高淡水鱼糜制品的品质,以淡水鱼糜为原料,利用罗非鱼皮提取明胶蛋白,探讨了添加鱼类明胶蛋白对淡水鱼糜凝胶形成性能的影响。结果表明,利用鱼皮提取的明胶中鲜味氨基酸占总氨基酸含量56.8%,表明鱼皮明胶具有一定的营养价值。将鱼皮明胶添加到鲢鱼鱼糜中,可以提高鱼糜凝胶的破断强度和保水性能,如当其添加量为鱼糜蛋白含量10%时,破断强度提高20%,失水率下降35%。根据鱼糜凝胶在各种蛋白质变性剂中的溶解性和溶解组分的SDS-PAGE分析结果,鱼皮明胶蛋白主要是通过离子键与鱼糜蛋白结合,进而提高鱼糜凝胶形成能。  

水产品过敏原的研究现状和展望

水产品作为人类食物的重要来源之一,其市场和消费群体不断扩大。与此同时,由水产品引发的食物过敏也日益增多,在联合国粮农组织公布的八大类过敏食物中,水产品就占了两大类。水产品过敏原有小清蛋白(Parvalbumin)、鱼卵蛋白(如鲑鱼的硫酸鱼精蛋白)和胶原蛋白(Collagen)、原肌球蛋白(Tropomyosin,TM)、精氨酸激酶(Arginine kinase)、肌球蛋白轻链(Myosin light chain)、肌钙结合蛋白(Sarcoplasmic calcium binding pro-tein)、血蓝蛋白亚基(Hemocyanin subunits)等。基于此,本文重点概述了国内外水产品过敏原及其加工脱敏技术的研究现状,以及今后水产品过敏原研究的发展趋势。  

文蛤特异性过敏原免疫识别的初步研究

目的:贝类是人类最优质的食用蛋白资源之一,也是联合国粮农组织公布的八大类过敏食物之一,贝类过敏反应严重影响着过敏人群的身体健康和生活质量,为此开展贝类过敏原的识别检测研究很有必要.方法:通过问卷调查初步了解食物过敏现状,获取自诉贝类过敏患者血清和正常人阴性对照血清,采用特异性IgE检测试剂盒筛选贝类过敏血清,应用组织捣碎提取蛋白、聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹等实验方法研究文蛤特异性过敏原.结果:文蛤肌肉主要蛋白的相对分子量约为200kD以上、200、90、80、70、46、36和24kD,其中能被贝类过敏血清特异性识别的90kD组分约占文蛤肌肉总蛋白的10%～20%,且主要为盐溶性蛋白.结论:文蛤的特异性过敏原为90kD蛋白组分.  

两种织纹螺肌肉蛋白的电泳鉴别

利用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）对有毒的光织纹螺（Nassarlus rutilans）和无毒的西格织纹螺（Nassarius siquin20rensis）的肌肉蛋白做鉴别分析。实验采用四种不同抽提液对肌浆蛋白和肌原纤维蛋白进行提取。肌肉蛋白经电泳后以考马氏亮蓝染色并对蛋白图谱作对比分析。根据蛋白条带的数量、迁移率及浓度等特点，比较得出两种织纹螺的差异条带。综合比较得出，前者的肌肉蛋白特异条带为34．9kDa、32．7kDa，后者的特异条带为36．0kDa。结果表明，以SDS—PAGE电泳法可实现对该两种织纹螺的初步鉴别。  

罗非鱼鱼鳞明胶蛋白膜的制备及特性

利用罗非鱼鱼鳞提取明胶制备蛋白可食膜,考察了明胶蛋白的浸提温度、浸提时间以及甘油添加量对蛋白膜抗拉伸强度(TS)、断裂延伸率(EAB)等理化性质的影响.结果发现明胶蛋白提取率随浸提温度的升高和浸提时间的延长逐渐增大.利用80℃加热0.5、1h浸提时,明胶蛋白不易被降解,以其为原料制备的蛋白膜TS可高达44MPa.另一方面,当蛋白膜中的甘油含量从20％增加到40％时,膜的TS从44.09MPa下降至16.45 MPa,而EAB、水蒸汽透过率(WVP)和透明度值则逐渐升高.然而膜的颜色不受甘油添加量的影响.SDS-PAGE结果显示甘油对明胶膜的蛋白组分没有明显的影响.根据DSC的分析结果可知,甘油含量为20％时,明胶蛋白膜的玻璃化转变温度(Tg)高达113.97℃,但随着甘油含量的增加,膜的Tg逐渐降低.