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1.
PCR方法检测食品中的转基因成分35S和NOS的研究   总被引:12,自引:2,他引:10  
根据转基因农作物中最常用的花椰菜叶病毒启动子(CaMV358)和根癌农杆菌终止子(NOS)的序列,设计并合成了两对不同的引物和相对应的两种荧光双链探针(FDCP),分别建立了常规PCR、应用FDCP的新型实时荧光PCR检测转基因成分35S启动子和NOS终止子的方法。利用该套方法对冷冻马铃薯条、大豆、冷冻玉米棒、甜椒、番茄等实物样品进行了检测,发现11份样品中有5份检出35S启动子、NOS终止子,6份样品结果为阴性。结果表明我们建立的两种PCR方法均能有效检测出35S和NOS片段,其中常规PCR方法具有灵敏度高、特性异好的特点;应用FDCP的新型实时荧光PCR方法则更为简便、快速、准确,有很好的应用前景和研究价值。  相似文献
2.
应用ELISA定量检测转基因玉米中Bt1蛋白的研究   总被引:5,自引:0,他引:5  
应用纯化的Bt1杀虫晶体蛋白作为标准蛋白和免疫抗原,通过抗体-抗原-酶标抗体反应,建立了酶联免疫吸附测定法(ELISA),以定量检测转基因玉米中的Bt1表达蛋白。用建立的ELISA法对4种进口玉米产品进行了测定,实验结果得到了免疫印迹分析的验证,并与进口试剂盒方法的定量分析结果相一致,因而建立的ELISA法具有操作简便、快速特异、定量准确、经济实惠的优点,特别适合于大批量检测,有着良好的应用前景。  相似文献
3.
目的:通过模拟肠胃液消化试验,分析锯缘青蟹肌肉中过敏原(原肌球蛋白)的消化特性以及消化对过敏蛋白致敏性的影响.方法:采用美国药典提供的模拟胃、肠液配方,测定青蟹原肌球蛋白和肌原纤维蛋白在体外模拟肠胃环境中的消化稳定性.以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹法(Western-blot)进行分析.结果:在模拟胃液反应中,非过敏原蛋白尤其是肌球蛋白重链和肌动蛋白等被胃蛋白酶快速降解,而原肌球蛋白在60 min时仍未被完全分解.在模拟肠液反应中,相对于致敏蛋白,肌球蛋白重链、肌动蛋白等非过敏蛋白在较短的时间内被分解,原肌球蛋白尽管120 min后几乎被完全分解,但会产生一些较稳定的蛋白降解片段.以免疫印迹法检测过敏患者血清,结果分子质量为34 kDa的原肌球蛋白降解产物仍具有过敏原性.结论:蟹类过敏蛋白相对于非过敏蛋白具有较高的消化稳定性,而且其高分子质量降解产物仍可能引起过敏反应.  相似文献
4.
建立一种快速测定水产食品中组胺的丹磺酰氯柱前衍生反相高效液相色谱方法。该方法中样品经三氯乙酸 提取、丹磺酰氯衍生,C18反相色谱柱分离,以70%乙腈和30%超纯水为流动相进行等度洗脱,254 nm波长处紫外检 测。结果显示,组胺保留时间为5.5 min,组胺在1~500 μg/mL范围内线性系数为0.999 9,仪器检出限(RSN=3)为 0.5 μg/mL,定量限(RSN=10)为1.0 μg/mL,且重复性良好;采用该方法测定了16 种水产品和19 种水产加工食品中 的组胺,结果显示含量在0~682.22 mg/kg之间;样品添加不同质量浓度组胺的回收率为89.54%~101.92%。结果表 明,该方法快速准确、灵敏度高、重复性好,适用于水产食品中组胺的测定。采用该方法检测了鲣鱼、鲭鱼和蓝圆 鲹在不同温度条件下的组胺变化情况,结果发现,3 种鱼在低温贮藏条件下的组胺含量明显低于高温贮藏条件下的 含量,表明低温贮藏可有效抑制组胺产生。  相似文献
5.
两种织纹螺肌肉蛋白的电泳鉴别   总被引:3,自引:0,他引:3  
利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)对有毒的光织纹螺(Nassarlus rutilans)和无毒的西格织纹螺(Nassarius siquin20rensis)的肌肉蛋白做鉴别分析。实验采用四种不同抽提液对肌浆蛋白和肌原纤维蛋白进行提取。肌肉蛋白经电泳后以考马氏亮蓝染色并对蛋白图谱作对比分析。根据蛋白条带的数量、迁移率及浓度等特点,比较得出两种织纹螺的差异条带。综合比较得出,前者的肌肉蛋白特异条带为34.9kDa、32.7kDa,后者的特异条带为36.0kDa。结果表明,以SDS—PAGE电泳法可实现对该两种织纹螺的初步鉴别。  相似文献
6.
TaqMan探针用于转基因食品的荧光定量PCR检测   总被引:3,自引:0,他引:3  
选择了内源基因大豆植物凝集素 (lectin)、玉米转化酶 (invertase)和外源基因抗草甘膦除草剂的 5 烯醇式丙酮酰莽草酸 3 磷酸合成酶 (cp4epsps)、抗欧洲玉米螟的苏云金芽孢杆菌杀虫毒蛋白 (cryIAb)的TaqMan探针 ,确定了探针浓度和镁离子浓度等反应条件 ,分别对转基因大豆和转基因玉米系列标准品进行内源基因和外源基因的荧光PCR扩增 ,在PCR反应过程中分别以TET和FAM两种荧光通道信号分别追踪同一样品DNA的内源基因和外源基因的扩增动力学变化 ,并依此绘制了ΔCt值与转基因食品百分比含量之间的标准曲线 ,建立了转基因大豆和转基因玉米的TaqMan -荧光定量PCR检测方法 ,该方法具有探针设计较简便、成本较低的特点 ,初步实现了对转基因食品的定量分析及品种鉴定。  相似文献
7.
多重PCR方法检测食品中转基因成分   总被引:3,自引:1,他引:2       下载免费PDF全文
根据转基因农作物中最常用的花椰菜花叶病毒启动子 (CaMV 3 5S)和根癌农杆菌终止子(NOS)的序列 ,设计合成了两对不同的引物和相对应的两种荧光双链探针 (FDCP) ,分别建立了多重PCR、应用FDCP的实时荧光PCR同时检测转基因成分 3 5S启动子和NOS终止子的方法 .并利用该套方法对马铃薯、大豆、玉米、甜椒、番茄等实物样品进行了检测 ,发现 1 3份样品中有 6份检出3 5S启动子、NOS终止子 ,其余 7份样品的检测结果为阴性 .表明作者建立的多重PCR方法能有效检测出 3 5S和NOS成分 ,其中多重PCR法具有灵敏度高、特异性好的特点 ,多重荧光PCR法则更为简便、快速、准确  相似文献
8.
罗非鱼鱼鳞明胶蛋白膜的制备及特性   总被引:2,自引:0,他引:2  
利用罗非鱼鱼鳞提取明胶制备蛋白可食膜,考察了明胶蛋白的浸提温度、浸提时间以及甘油添加量对蛋白膜抗拉伸强度(TS)、断裂延伸率(EAB)等理化性质的影响.结果发现明胶蛋白提取率随浸提温度的升高和浸提时间的延长逐渐增大.利用80℃加热0.5、1h浸提时,明胶蛋白不易被降解,以其为原料制备的蛋白膜TS可高达44MPa.另一方面,当蛋白膜中的甘油含量从20%增加到40%时,膜的TS从44.09MPa下降至16.45 MPa,而EAB、水蒸汽透过率(WVP)和透明度值则逐渐升高.然而膜的颜色不受甘油添加量的影响.SDS-PAGE结果显示甘油对明胶膜的蛋白组分没有明显的影响.根据DSC的分析结果可知,甘油含量为20%时,明胶蛋白膜的玻璃化转变温度(Tg)高达113.97℃,但随着甘油含量的增加,膜的Tg逐渐降低.  相似文献
9.
虾类过敏原的识别、纯化和检测技术研究   总被引:2,自引:1,他引:1  
虾类是人类优质的食用蛋白资源之一,也是联合国粮农组织公布的八大类过敏食物之一。虾类过敏反应严重影响着过敏人群的身体健康和生活质量,为此开展虾类过敏原的识别、纯化和检测技术研究非常必要。通过问卷调查初步了解食物过敏现状,获取自诉虾类过敏患者血清和正常人阴性对照血清,采用特异性IgE检测试剂盒筛选虾类过敏血清。提取南美白对虾蛋白,进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳及免疫印迹识别虾类过敏蛋白,并对患者识别率最高的虾类的主要过敏原进行分离纯化。采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫印迹和酶联免疫吸附测定等方法对纯化虾蛋白进行检测分析。患者识别的南美白对虾致敏原的分子质量依次约为200、175、116、85和36kDa,通过硫酸铵盐析及等电点沉淀等方法可以得到电泳纯的虾主要过敏蛋白。免疫印迹结果证实纯化的虾蛋白是具有过敏原性的原肌球蛋白,在此基础上,建立了虾原肌球蛋白的酶联免疫吸附测定方法。  相似文献
10.
九孔鲍鱼纤维素酶的分离纯化与性质分析   总被引:2,自引:0,他引:2  
采用SP-Sepharose阳离子葡聚糖凝胶交换柱层析、Sephacry S-200丙烯葡聚糖凝胶柱层析和Hydrox-yapatite羟基磷灰石柱层析,从九孔鲍鱼(Haliotis diversicolor)消化腺中分离纯化到一种纤维素酶.SDS-PAGE结果显示,该酶的分子质量约为55kDa.该酶水解解甲基纤维素钠的最适温度50℃,最适pH5.5.该酶在温度40℃以下,pH50~7.0之间具有较好的稳定性.  相似文献
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