抗3种β-激动剂双特异性单克隆抗体的建立及鉴定

制备抗克仑特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺双特异性抗体并初步鉴定。将分泌抗克仑特罗、沙丁胺醇抗体的细胞株和分泌抗莱克多巴胺抗体的细胞株分别驯化,使之成为HAT敏感株。将两者融合,筛选分泌双特异性单克隆抗体的杂交-杂交瘤株,然后对其进行初步鉴定。共获得5株杂交-杂交瘤细胞株,将其分泌的双特异性单克隆抗体(BsAb)经过酶联免疫吸附法(ELISA)初步检测,IC50可达1 ng/mL,腹水效价为105以上,用ELISA法证明BsAb只与克仑特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺有特异性反应。该方法制备简单、风险低、灵敏度高、周期短,具有较好的应用前景。     

木薯叶粉中赭曲霉毒素A快速检测方法的建立

目的 开发快速检测方法检测木薯叶粉中的赭曲霉毒素A(Ochratoxins A, OTA)。方法 利用单克隆抗体和酶标抗原, 建立了竞争酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)快速检测方法。用不同浓度的氯化钠甲醇水溶液、乙腈和磷酸盐缓冲液等作为样本提取液提取木薯叶粉中OTA, 用活性炭和稀释法减少样本基质干扰。结果 ELISA灵敏度为0.2 ng/mL, IC50为0.878 ng/mL。木薯叶粉用含氯化钠的70%甲醇水溶液提取, 离心后取上清5倍稀释, 样本回收率80%~121%, 检测限为5 μg/kg, 满足国标规定食品中OTA不超过5 μg/kg的要求, 检测时间为30 min, 一次可批量检测90个样本。结论 用本研究建立的ELISA方法检测木薯叶粉及其食品中的OTA含量结果准确、操作简单、成本低、时间短、重复性好, 适合基层批量筛查。     

反应条件对黄曲霉毒素B1抗原-抗体结合的影响分析

目的 探索酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)反应中反应条件对抗原(antigen, Ag)与抗体(antibody, Ab)结合的影响。方法 以黄曲霉毒素B1 (aflatoxin B1, AFB1)抗原抗体为主要研究对象, 通过分析ELISA中包被方法、包被液、离子浓度、pH、时间、温度、终止液等不同反应条件下的吸光度值(optical density, OD)和抑制率等指标, 了解反应过程中抗原与抗体结合的差异情况, 讨论反应条件对抗原-抗体结合的影响。结果 两步包被抗体法效价高、抑制率好, 包被液用pH 7.0、0.1 mol/L的磷酸氢二钠-磷酸二氢钾抑制率高, 封闭时间影响较小, 25℃反应更适合操作, 辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)标记抗原稀释液离子浓度0.020 mol/L pH=7.0时抗原-抗体结合最好, 用盐酸比硫酸作为终止液更稳定。结论 包被方法、包被液、离子浓度、pH、时间、温度、终止液等条件, 均是影响抗原-抗体结合的因素。     

食用木薯块根冻结特性及代谢产物分析

为了解木薯块根冻结特性及其代谢产物,以食用木薯品种“华南9号”为研究对象,通过电导率法测定块根头、中和尾3个部位的冻结变化规律及相关影响因素,结合非靶向代谢组学进行差异代谢物分析。结果表明:木薯块根不同部位冰点范围为?0.6至?1.1 ℃,但发生冻结的时间不一致;不同部位的可溶性固形物含量与淀粉含量最高值均出现在头部,分别为7.00%和26.84%,但各部位间的含量差异不显著（P>0.05）,而含水量最高值出现在尾部,为64.07%;相关性结果分析发现,冰点与可溶性固形物、含水量呈负相关关系,与淀粉含量呈正相关关系。非靶向代谢组学分析发现,与对照相比冰温处理存在41个具有显著差异表达的代谢物,以苯丙氨酸代谢途径富集程度最高,共有9个显著差异代谢物。该途径中马尿酸-苯甲酸-水杨酸通路的马尿酸、苯甲酸表达上调,这可能与块根对低温应答响应有关。该研究结果可为今后木薯块根低温贮藏提供理论参考。     

发酵条件对木薯嫩梢腌制蔬菜营养品质和风味的影响

目的 探究发酵条件对木薯嫩梢腌制蔬菜(pickled vegetables with cassava tender shoots, PVCT)营养品质和风味影响。方法 分别采用模糊数学感官综合评价法、电感耦合等离子体发射光谱法、高效液相色谱法和顶空固相微萃取-气相色谱-质谱法对不同原料配比和发酵时间条件下的PVCT感官评分、元素、有机酸和挥发性成分进行分析。结果 木薯嫩梢、橄榄酱、食盐水浓度配比为100:15:2 (m:m:c)时, 感官评分最高, 且有较高的K、Mg和P元素含量(分别为1126.74、206.00、276.88 mg/100 g)和适中的Ca、Zn和Mn等元素(分别为503.41、13.21、276.88 mg/100 g)。发酵腌制10 d后脂肪含量达到最低值, 为1.78 g/100 g, 蛋白质含量在腌制的第15 d到达最高值, 为28.34 g/100 g。亚硝酸盐含量在发酵10 d后趋于稳定, 约为0.97 mg/kg; PVCT经炒制后氰化物含量符合国家安全标准, 约为0.0595 mg/kg; 单宁含量对PVCT风味影响较小, 且在发酵30 d后含量降至最低, 为1.75 g/100 g。乳酸(含量最高为33.96 mg/g)为主要有机酸成分, 挥发性物质在第10天开始显著富集, 第15天后丰度逐渐下降, 其中烃类物质(含量最高为83.76%)在PVCT中最丰富。结论 不同原料配比和不同发酵时间会显著影响PVCT品质, 发酵会造成矿物质元素不同程度的流失, 而有机酸和挥发性风味的富集并不是发酵越久越好, 其主要集中在发酵的10~15 d, 因此, 木薯嫩梢发酵菜的腌制应综合考虑原料的配比和发酵时间, 研究可为木薯叶食品化利用提供新方向和数据参考。     

食用木薯块根及其制品中生氰糖苷检测方法的建立与应用

生氰糖苷含量的高低对评估食用木薯块根及其制品的食用安全性及其重要。以木薯块根和木薯粉为试材,本研究建立了亚麻苦苷和百脉根苷2种生氰糖苷（Cyanogenic Glycosides,CNGs）的快速提取和高效液相色谱-蒸发光散射（HPLC-ELSD）检测的方法,分析了不同品种木薯块根、木薯粉及其制品中CNGs含量变化。结果表明,食用木薯块根及木薯粉中CNGs提取最佳的硫酸溶液浓度分别为0.025和0.100 mol/L;HPLC-ELSD检测方法可有效分离亚麻苦苷和百脉根苷,其浓度在4.1～820.0 mg/L和2.5～250.0 mg/L范围内线性相关性较好,相关系数（r）分别达到了0.9996和0.9993,检测限（LOD）分别为2.1和0.5 mg/kg,定量限（LOQ）分别为8.2和2.0 mg/kg;该方法重复性和样品稳定性的标准偏差（RSD）都低于5.0%;木薯块根和木薯粉中2种CNGs的平均加标回收率分别在89.3%～96.3%和107.5%～114.9%之间,重复间RSD小于3.4%。样品验证结果表明:不同的木薯品种CNGs含量差异较大;种植8～9个月的木薯制备木薯粉CNGs含量较低;蒸煮加工方式可有效清除木薯食品中CNGs。本方法操作简单、稳定性较好、准确度高,在食用木薯块根及其制品中CNGs的分析与评价等研究方面具有较强的应用前景。     

乳品中β-内酰胺类抗生素快速检测试纸条研制

通过β-内酰胺类抗生素-载体蛋白偶联物的合成,单克隆抗体的制备与纯化,胶体金标记物的制备,β-内酰胺类抗生素单克隆抗体-胶体金标记物的制备并冻干到微孔试剂,样品吸收垫和反应膜的制备等研究过程,研制出乳制品中β-内酰胺类抗生素的快速检测试纸条。检测限分别为:青霉素G2μg/L、氨苄青霉素4μg/L、阿莫西林5μg/L、苯唑青霉素/邻青霉素/双青霉素均为6μg/L、头孢洛宁10μg/L、萘夫西林20μg/L、头孢喹肟20μg/L、头孢曲松25μg/L、头孢哌酮50μg/L、头孢噻呋90μg/L;本试纸条特异性好、假阳性率不高于3%、假阴性率为0,检测时间不超过15min,检测限量达到了我国和欧盟的要求,适用于乳品流通环节乳品中β-内酰胺类抗生素残留的检测。     

不同菌种发酵木薯粉品质和糊化特性比较分析

以华南9号木薯（SC9）块根为原料,利用5个菌种进行发酵,比较分析发酵前后木薯粉常规营养品质、有机酸风味物质组成和结构特性等差异。结果表明,酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）发酵显著提高（P<0.05）木薯粉的蛋白质含量,比对照组提高2.2倍,达0.83 g/100 g;而许旺酵母（Schwanniomyces occidentalis Kl?cker）发酵可显著降低氰化物含量（P<0.05）,降解率达91.82%;枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）发酵后有机酸含量最高,达到10.987 mg/g,并显著提高了粗多糖得率（P<0.05）,达到1.59%。从加工特性看,枯草芽孢杆菌发酵后,糊化特性的峰值黏度、谷值黏度、最终黏度均显著提高（P<0.05）分别为5 397.5、3 439.0、4 770.0 mPa·s,衰减值显著降低（P<0.05）,为1 958.5 mPa·s。结构特性分析表明,发酵后木薯粉淀粉颗粒均匀,显著变小。综合对比,利用枯草芽孢杆菌发酵木薯粉,有利于提高木薯粉的脂肪、有机酸、粗多糖等营养品质并...