疏绵状嗜热丝孢菌脂肪酶在毕赤酵母中的高效表达和性质鉴定

通过密码子优化改造编码sn-1,3位置专一性疏绵状嗜热丝孢菌脂肪酶(TLL)基因,同时通过重叠PCR技术合成该基因,并将其克隆到巴斯德毕赤酵母的表达载体p PIC9K中。结果表明,TLL脂肪酶被高效胞外表达,在摇瓶中发酵168 h得到的发酵液的上清脂肪酶表达量达到0.1 mg/m L,对应的p NPP水解酶活达到312.72U/m L。与对应的原始编码基因重组菌酶活(179.42 U/m L)相比,密码子优化后酶活提高74.29%,表明密码子优化策略成功提高了TLL在巴斯德毕赤酵母中的重组表达。比较毕赤酵母来源的重组TLL与商业化的米曲霉酶学性质发现它们具有相似的最适p H和温度耐受范围。另外,它们在有机溶剂耐受性、表面活性剂和金属离子效应以及位置选择性方面均较为相似,表明毕赤酵母来源的重组TLL同样具有商业化应用的潜力。     

米黑根毛霉脂肪酶基因的酵母重组表达和Kex2位点改造

米黑根毛霉脂肪酶(RML)具有较高的合成活性、热稳定性、溶剂耐受性以及sn-1,3位置专一性等一系列适合工业化推广的特点。本研究通过密码子优化改造RML编码基因,并将其克隆、转化到毕赤酵母GS115菌株,经诱导发酵156 h,酶活达到3.77 U/mL。为了进一步改善RML脂肪酶的重组表达,通过定点突变的方式去掉潜在的Kex2酶切位点,结果显示:RML突变体表达量均显著低于野生型的RML脂肪酶,表明"-Arg196-Arg197-"序列并不影响RML的重组表达。通过对RML蛋白结构分析,Kex2酶切位点的肽键被包埋在蛋白内部,这表明该位点区域的折叠在进入分泌途径时已基本完成。本研究对异源蛋白的酵母重组表达具有一定参考价值。     

酪蛋白酸肽（CPPs）的分子量及持钙功能的分析

实验对不同来源的酪蛋白磷酸肽（ＣＰＰｓ）的氮与磷的摩尔比值（Ｎ：Ｐ）、分子大小及结合钙的最大量进行了分析和测定，初步探讨了ＣＰＰｓ和Ｎ：Ｐ，分子大小和结合钙的能力之间的关系。Ｎ：Ｐ较小则ＣＰＰｓ制品的纯度较高或磷酸基密度较大，也即ＣＰＰｓ制品中分子量较小部分占的比例较大，结合钙的能力也较强，Ｎ：Ｐ能较客观和综合地反映ＣＰＰｓ的肽链长度和磷酸基密度，因而可以作为ＣＰＰｓ的特性指标     

气相色谱法测定月桂酸单甘酯含量的方法研究

为建立气相色谱测定月桂酸单甘脂的方法,采用六甲基二硅胺烷(HMDS)和三甲基氯硅烷(TMCS)作为衍生化试剂,用吡啶作溶剂和催化剂将月桂酸单甘酯合成粗品中的各种组分硅烷化,用OV-17玻璃填充柱进行分离分析,并以十四酸作为内标物,用内标法进行定量。试验结果:月桂酸单甘脂的线性范围是1.11～11.11mg/mL,检出限是0.063mg/mL。此外,将气相色谱法同高碘酸氧化法进行了比较,结果表明:气相色谱法比高碘酸氧化法高效、精确。     

反相高效液相制备色谱分离酪蛋白磷酸肽

介绍了用反相C18液相制备色谱柱分离生物活性肽酪蛋白磷酸肽的方法，经过两次不同梯度的洗脱，得到了4种不同组分的酪蛋白磷酸肽，经过氨基酸分析仪测定，确定了其中3种的分子结构，分别为αs1(62-79),αs1(43-79),β(7-24)。     

龟肉蛋白肽延缓果蝇衰老的作用及机制研究

目的:探究龟肉蛋白肽（pond turtle protein-derived peptides,PTPDP）延缓果蝇衰老的作用和机制。方法:酶解乌龟肉得到PTPDP,测定其营养成分、分子质量分布以及氨基酸组成;分别以0.2%、0.4%和0.8%的PTPDP喂养果蝇,通过生存实验和测定体内超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、过氧化氢酶（catalase,CAT）活性和丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量来分析其抗衰老功能;通过测定0.8% PTPDP喂养的雌性果蝇抗氧化相关基因Sod1、Sod2、Cat和寿命相关基因mth、Rpn11的表达来探究其抗衰老机制。结果:龟肉酶解产物以1000 Da以下的小分子肽段为主,富含甘氨酸、谷氨酸和脯氨酸等具有抗氧化活性的氨基酸。生存实验和抗氧化活性实验中,0.8% PTPDP组雌雄果蝇的平均寿命分别显著延长了18.92%和9.37%（P<0.01);SOD活性分别显著提高了7.13%和7.37%（P<0.05）;CAT活性分别极显著提高了42.14%和84.66%（P<0.01）;MDA含量分别显著下降了22.22%和23.08%（P<0.05）。基因表达结果显示,0.8% PTPDP喂养显著上调了抗氧化相关基因Sod1,Sod2（P<0.05）和Cat（P<0.01）的表达,同时对寿命相关基因mth和Rpn11（P<0.01）的表达也表现出显著的调节作用。结论:PTPDP通过影响果蝇抗氧化和寿命相关基因的表达,提高其体内抗氧化活性,延长果蝇寿命,有潜在的抗衰老功效。     

脂肪酶固定化新材料

脂肪酶因其在油脂工业中的重要作用而成为酶研究领域的重点。脂肪酶的不稳定性和高昂的价格是限制其广泛应用的主要原因。对脂肪酶进行固定化是增强其稳定性、降低应用成本的关键。改进脂肪酶固定化工艺的一个重要方面就是选择和开发适合相应脂肪酶的固定化材料。从脂肪酶的固定化材料方面,对无机、有机、复合载体等固定化材料进行了综述,特别是对各种新型的固定化材料予以了归纳,对脂肪酶固定化材料的选择有一定的指导意义。     

生理活性物质酪蛋白磷酸肽的功能及应用

生理活性物质酪蛋白磷酸肽的功能及应用冯凤琴，许时婴，王璋（无锡轻工大学食品科学与工程系，无锡，２１４０３６）自然界赋予很多食物以保健和治疗功能。由于我们在分子水平上对食物成分进行分析和测试的能力不断提高，因此，对食物成分的分子结构与功能的关系以及它们...     

Silver-ion HPLC测定1,3-二油酸-2-棕榈酸三酰甘油的含量

准确测定1,3-二油酸-2-棕榈酸三酰甘油(OPO)的含量,建立了一种以高效液相色谱结合银离子交换柱(Silver-ion HPLC)的测定方法。以ChromSpher 5 Lipid(25 cm×4.6 mm,5μm)银离子交换柱通过HPLC正相系统分离三酰甘油,配合蒸发光散射检测器(ELSD),以毒性较小的二氯甲烷和丙酮为流动相。流速0.6 mL/min,柱温30℃。漂移管温度30℃,空气压力0.35 MPa。在此条件下,1,3-二油酸-2-棕榈酸三酰甘油和1,2-二油酸-3-棕榈酸三酰甘油两种同分异构体基本达到分离,样品出峰完整,峰形良好。OPO色谱峰面积的自然对数与浓度的自然对数呈良好的线性关系(R2=0.998 8)。用该方法测定了母乳脂肪、实验室合成结构油脂样品、商品结构油脂、棕榈油和山茶油中OPO的含量。结果表明该方法的灵敏度高、重现性良好。