Ca2+对菠萝蛋白酶热稳定性和二级结构的影响

研究了Ca2+对菠萝蛋白酶活性及远紫外圆二色谱的变化.在37℃下,Ca2+与酶作用1h后,5～10mmol/L Ca2+对酶的活性均有促进作用,其中当Ca2+浓度为2mmoL/L时.促进作用最明显.在60℃下,Ca2+浓度为3mmol/L时,对菠萝蛋白酶的热稳定化效果最好,处理100min后仍然能保留68%的活性;菠萝蛋白酶在60℃下活性的半衰期为86min,除Ca2+浓度为1mmoVL外,其他浓度(2、3、4、5mmol/L)的Ca2+与菠萝蛋白酶作用后,酶的半衰期均有所延长.由圆二色谱曲线发现,菠萝蛋白酶在波长209nm与221am处有明显的负峰.与Ca2+作用后菠萝蛋白酶的α-螺旋、β-转角和无规则卷曲均有所变化,其中,在37℃下加入Ca2+后,菠萝蛋白酶的α-螺旋均减少,而β-转角有所增加.在70℃下处理1h,Ca2+对菠萝蛋白酶二级结构也有所影响.无Ca2+处理的菠萝蛋白酶和加入4mmol/L Ca2+的菠萝蛋白酶的α-螺旋分别减少为34.90%和35.60%,而β-转角则有所增加,分别为26.30%和25.10%.圆二色谱结果表明,α-螺旋结构对菠萝蛋白酶的稳定性起关键作用.     

Ca^2＋和聚乙二醇对菠萝蛋白酶活性和热稳定性的影响

研究了Ca2 和聚乙二醇对菠萝蛋白酶活性及热稳定性的影响.在37℃下,Ca2 与酶作用1 h后,5～10mmol/LCa2 对酶的活性均有促进作用,其中当Ca2 浓度为2 mmol/L时,促进作用最明显.在60℃下,Ca2 浓度为3 mmol/L时对菠萝蛋白酶的热稳定性效果最好,处理100 min后仍然能保留68％的活性;菠萝蛋白酶在60℃下活性的半衰期为86min,除Ca2 浓度为1 mmol/L外,其他浓度(2 mmol/L、3 mmol/L、4 mmoFL和5 mmol/L)Ca2 与菠萝蛋白酶作用后,酶的半衰期均有所延长,未经修饰的聚乙二醇6000加入酶反应体系中,其对酶活性起很大的抑制作用,且酶的热稳定性也未得到改善.