乳源性多肽体外模拟胃肠消化实验及其对淋巴细胞增殖的影响

用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色法筛选乳源性多肽,进一步采用体外模拟胃肠道消化的方法,检测经过胃蛋白酶和胰酶酶解后的合成多肽对小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖的影响,并采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(U-PLC-Q-TOF-MS)分析模拟消化后的产物。结果表明,QEVPL具有较好的刺激淋巴细胞增殖能力,经体外模拟消化,终产物促进淋巴细胞增殖的能力下降至原来的93.71%,但没有显著差异。质谱分析结果显示,QEPVL体外模拟消化的终产物为QEPV。进一步的验证实验表明,消化产物QEPV的刺激指数为1.1466,仍具有促进淋巴细胞增殖能力。     

瑞士乳杆菌发酵乳中生物活性小肽的免疫功能特性研究

利用MTT、中性红吞噬、一氧化氮诱生分泌等方法从已获得的瑞士乳杆菌发酵乳来源小肽中筛选出对小鼠腹腔巨噬细胞具有免疫活性的小肽GLPN,并通过ELISA方法检测TNF-Ω,IL-1β,IL-6的细胞因子水平,以对具有的免疫促进作用效果进行评估.结果表明,GLPN在0.1 g/L质量浓度下所有指标上都能表现出显著的促进作用,而在LPS作用下,GLPN质量浓度达到0.5 g/L也未引起炎症因子的过量表达.     

三种具有相同结构多肽的抗氧化功能构效关系的研究

本课题基础研究结果表明,瑞士乳杆菌在分解牛奶酪蛋白时可以产生三种具有相同氨基酸结构的多肽DELQ、DELQDKIH和DELQDKIHPF。为了探索这三种多肽是瑞士乳杆菌分解牛奶酪蛋白产生的中间产物还是最终功能性物质,采用DPPH法和ABTS法测定了这三种多肽的体外清除自由基能力和总抗氧化能力,在此基础上探讨了抗氧化肽的构效关系。实验结果表明,DELQDKIHPF的抗氧化活性最强,其次是DELQDKIH,DELQ,分析这三种多肽多数是瑞士乳杆菌分解酪蛋白时产生的中间产物,多肽的抗氧化活性与氨基酸的种类、数量和排列顺序等均相关,为今后抗氧化肽保健品、化妆品以及药物的开发奠定了基础。     

三种乳源生物活性肽的二肽基肽酶-Ⅳ抑制活性研究

通过从分化成熟的人克隆结肠腺癌细胞(Caco-2细胞)中提取二肽基肽酶-Ⅳ(DPP-Ⅳ)建立体外筛选DPP-Ⅳ抑制剂的模型,用Ile-Pro-Ile(IPI)作为阳性对照测定其半抑制质量浓度(IC_(50))评价该模型,并测定3种来源于酪蛋白的四肽Leu-Pro-Leu-Pro(LPLP)、Gln-Glu-Pro-Val(QEPV)和Asp-Gln-Leu-Gln(DELQ)的抑制率,研究了DPP-Ⅳ抑制肽的抑制类型和复合抑制作用。实验结果表明:IPI的IC_(50)为(31.51±1.51)μg/m L,与文献报道的相近,证明该模型可以应用于DPP-Ⅳ抑制剂的筛选;LPLP的IC_(50)为(0.84±0.06)mg/m L,QEPV的IC_(50)为(14.45±1.07)mg/m L而DELQ的IC_(50)大于100 mg/m L,即LPLP和QEPV具有一定的抑制作用;LPLP和QEPV的作用均为非竞争性机制,并且两种多肽联合对DPP-Ⅳ抑制作用为协同抑制作用。