新一代诊断技术：CRISPR系统及其在分子诊断中的应用

作为新兴的基因编辑和调控工具,CRISPR系统具有高度的特异性、灵敏度和灵活性。除在基因编辑和改造方面有重要作用外,在传染病诊断、环境监测、食品安全检测等方面也有着良好的前景。随着CRISPR/Cas系统的深入研究,通过其高特异性识别目标序列和反式切割能力,已经建立了多种简便、灵敏的生物传感平台,解决了传统方法在操作、灵敏度、特异性及检测周期方面存在的不足。作者将主要介绍应用最广的两类CRISPR/Cas系统的特征和机制,总结了基于CRISPR/Cas系统开发的核酸、蛋白质和小分子物质构建的生物传感体系和未来发展方向。     

双酚A的酶联免疫检测方法的建立

将双酚A(BPA)半抗原与牛血清白蛋白(BSA)共价偶联后,制备兔抗双酚A多克隆抗体,建立了双酚A间接竞争酶联免疫(icELISA)检测方法,并对其进行了方法学评价。结果表明:最佳的抗体稀释度为1∶1600,双酚A竞争标准曲线在0.3～100μg·mL-1之间具有良好的线性关系,最低检测浓度为0.001μg·mL-1,重现性实验变异系数均小于10%。交叉反应实验中,与双酚酸和双酚B的交叉反应率分别为20.0%和10.0%;与双酚E和4-枯基苯酚的交叉反应率均在5%以下。水样的添加回收实验,回收率范围为92.5%～107.7%。     

食品中百草枯3种检测方法的比较

通过对粮食作物中的百草枯残留检测方法进行比较研究,得到各种方法的优劣.结果:HPLC的最低检测限为12 mg/L,加标回收率为42%～52%,相对标准偏差(RSD)为4.43%;ELISA的最低检测限为0.005 mg/L,加标回收率为70%～80%,相对标准偏差(RSD)为8.15%;GICA的最低检测限为50 mg/L,通过一个标准的颜色反应系列,可以非常简便、快速的对样品进行现场检测,是快速检测发展的一个方向.     

承重混凝土小型空心砌块施工技术

对混凝土小型空心砌块的特点作了阐述，介绍了混凝土小型空心砌块的施工工艺及施工要点，并对钢筋混凝土芯柱的施工作了探讨，经实践证明，均取得了较好的经济效益和社会效益。     

锚索注浆加固岩体

岩体加固问题的紧迫性是众所周知的。随着开采深度的增加,这一紧迫性也日益增加。按暴露面形成的时间,岩体加固可分为后加固及预加固。前者是从已经形成的开采空间进行,后者是在暴露面形成之前预先实     

肉和鱼中过氧化脂类的荧光过氧化物酶的检测法

肉和鱼中过氧化脂类的荧光检测是采用豌豆过氧化物酶方法。干冻的发芽豌豆种子微粒作为过氧化物酶源，过氧化氢添加量和荧光的线性关系是通过甲基亚油酸过氧化氢、亚油酸过氧化氢、甘油三酯过氧化氢、胆磷脂过氧化氢观察的。与肉和鱼中上述组份含量相当的α－生育酚并不影响过氧化物酶反应，这个测定专门用于过氧化氢。这个方法不需从肉和鱼中萃取总脂，可直接测定均质样品中过氧化脂类总量。     

正丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸离子液体介导在呕吐毒素酶联免疫检测中的应用研究

呕吐毒素是食品中常见的一种真菌毒素,目前最常用的检测方法为酶联免疫检测。本文研究合成了一种水溶性离子液体正丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸,并将其应用于呕吐毒素（DON）酶联免疫检测。结果表明:当呕吐毒素酶联免疫（ELISA）体系中含有0.014g/mL的该离子液体时,其检测灵敏度提高了约33.92%。半数抑制浓度分别为54.95μg/kg和36.31μg/kg（前者不含离子液体）。重复测定多次,其半数抑制浓度平均值为36.85μg/kg,表明重现性较好。另外,该方法已用于啤酒和麦芽汁中DON加标测定回收率。      

食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇三种检测方法的比较研究

对谷物中DON的检测方法进行了研究,确定了各检测方法的参数,HPLC方法最低检出限为52μg/L,加标回收率为78.92%,相对标准偏差RSD为1.88%,精密度很高;ELISA方法的最低检出限为10μg/L,加标回收率为104%,RSD为5.8%;金标试剂条检测可做出一个标准的颜色反映系列,重现性很好,最低检出限为1000μg/L,加标回收率也很高。金标检测方法简便、快速,适用于现场检测,是未来检测方法的发展方向。      

孕期传统和新兴真菌毒素暴露的胚胎发育毒性及其生物监测的研究现状

真菌毒素是某些真菌菌种在特定条件下产生的有毒次级代谢产物。研究发现多种真菌毒素的联合暴露可引起胎儿发育迟缓、胚胎停育甚至流产等胚胎发育毒性。目前,尚没有关于孕期真菌毒素暴露对宫内胎儿胚胎发育毒性的影响和生物监测情况的系统报道。因此,为预防和降低孕期真菌毒素暴露带来的危害,本文梳理了孕期传统真菌毒素如黄曲霉毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮和新兴真菌毒素如交链孢毒素、白僵菌素和恩镰孢菌素等暴露引起的胚胎发育毒性,以及以生物标志物如暴露标志物和效应标志物为基础的生物监测技术的研究现状。     

脱氧雪腐镰刀烯醇（呕吐毒素）酶标抗原的合成及免疫抗体的制备

利用琥珀酸酐法合成了脱氧雪腐镰刀烯醇-琥珀酸酐衍生物（3-HS-DON）,并用DCC法将该衍生物与牛血清白蛋白（BSA）偶联得到的结合物（DON-HS-BSA）作为免疫抗原免疫新西兰大白兔,获得效价为1∶10000的特异性抗脱氧雪腐镰刀烯醇（DON）的抗体。同时,用EDC法将3-HS-DON与辣根过氧化物酶（HRP）偶联得到酶标抗原（DON-HS-HRP）。通过圆二色光谱（CD）看到偶联后蛋白二级结构发生了改变,酶活稍有下降;用分光光度法测得酶标抗原酶活损失<5%,偶联物中DON与HRP的结合比为5.29。说明:该酶偶联物及制备的抗体可作为酶联免疫吸附法（ELISA）或免疫传感器法测试脱氧雪腐镰刀烯醇时所需的酶标抗原及抗体。