上转换荧光技术在食品安全检测技术中的应用

上转换荧光技术是基于上转磷光体的新型检测技术, 因其独特优越性, 成为标记检测技术中新的研究热点。本文综述了上转换荧光技术的研究机制、国内外实际应用和发展状况等。发现该技术在大肠杆菌、布鲁氏菌、链球菌等食品安全检测中应用效果极佳, 但当前技术仍有一定缺陷, 亟需通过改进合成工艺、表面修饰等方法完善, 进一步推进其在食品安全检测领域的应用。     

免疫磁珠捕获PCR快速检测单核细胞增生李斯特氏菌

利用免疫磁珠富集单核细胞增生李斯特氏菌,采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增进行快速检测。所制备的免疫磁珠选取在37℃条件下均匀振荡1 h为最佳包被条件,1 mg磁珠偶联抗体的最佳量为100μg/mg,制备的免疫磁珠捕获率为45%。所建立的免疫磁珠捕获-PCR技术在样品细菌浓度达到104 CFU/m L即可被检出,其灵敏度是直接PCR检测限(105 CFU/m L)的10倍,可为病原菌的富集和快速检测提供新方法。     

乳粉中阪崎肠杆菌污染检测试剂盒的研制

目的:以乳粉中污染的阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii)为检测目标,开发一种能快速检测其污染的试剂盒。方法:以两株阪崎肠杆菌单克隆抗体分别为包被抗体和检测抗体,建立双抗体夹心酶联免疫吸附实验方法,优化各个反应条件,制成在2 h内能发生显色反应的检测试剂盒。结果:包被抗体的最佳工作质量浓度为10?μg/mL,检测抗体的最佳稀释倍数为1∶5 000。试剂盒的检测限为10~4 CFU/mL,在10~4~10~8 CFU/mL范围内OD450 nm值与阪崎肠杆菌浓度的常用对数值呈线性关系。特异性实验中,试剂盒可检出3株阪崎肠杆菌标准菌株,对其他9株食品中常见致病菌的检测均呈阴性。模拟带菌实验中,初始菌浓度为1 CFU/mL的模拟样品经过8 h前增菌后,通过该试剂盒便可检出。该试剂盒的批内、批间变异系数均小于6%,至少可在室温保存6个月。结论:该双抗体夹心试剂盒具有灵敏度高、特异性好、精密度高、稳定性强等优点,可应用于乳粉中阪崎肠杆菌的快速检测。     

抗瓜类细菌性果斑病菌单克隆抗体的制备及特性鉴定

以瓜类细菌性果斑病菌燕麦嗜酸菌西瓜亚种(Acidovorax avenae subsp.citrulli,Aac)野生型菌株SD01免疫BALB/c小鼠,间接酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法筛选获得4株稳定分泌抗SD01菌株的单克隆杂交瘤细胞株6F、6D、7E、4F,腹水抗体效价分别为1∶102 400、1∶102 400、1∶25 600、1∶51 200。采用饱和硫酸铵沉淀及Protein-G亲和层析法纯化腹水,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gelelectrophoresis,SDS-PAGE)显示纯化后的单克隆抗体(m Ab)纯度较高,纯化后单克隆抗体(2 mg/m L)效价分别为1∶12 800、1∶6 400、1∶3 200、1∶6 400,亚型鉴定结果表明4种单克隆抗体均为Ig G2 a。间接ELISA结果表明,4种单克隆抗体对8种果斑病菌结合能力不同:6F可以结合6种,6D、4F可以结合8种,7E可以结合5种。与3种非Aac近源种植物病原菌交叉反应情况为:6F、4F与2种非Aac近源种植物病原菌存在交叉反应,6D、7E与3种非Aac近源种植物病原菌均无交叉反应。     

两种司帕沙星完全抗原的合成鉴定及免疫效果研究

目的:用两种方法合成司帕沙星人工抗原,并制备相应的鼠源多克隆抗体。方法:用混合酸酐法和DCC法将半抗原SPFX与BSA偶联制备免疫原SPFX-BSA,通过DCC法制备人工包被原SPFX-OVA,采用紫外光扫描和聚丙烯酰胺凝胶电泳进行鉴定与分析。免疫小鼠后,采用间接ELISA法测定多抗血清效价,阻断ELISA,鉴定其抑制价和特异性。结果:UV和SDS-PAGE鉴定结果初步表明SPFX人工抗原成功合成;动物试验表明,4只小鼠多抗血清效价均在3.2×104以上,其中1号小鼠IC50值为163.87 ng/mL,与其他竞争物无明显交叉反应,抗体特异性良好。结论:两种偶联方法均能成功合成人工抗原,制备出鼠源抗SPFX多克隆抗体,其中混合酸酐法能明显提高完全抗原的合成和免疫效果。     

免疫层析试纸技术及其在食品安全检测中的应用

免疫层析试纸因其使用方便,耗时少,结果稳定,价格相对低廉,可适用现场和家庭检测,在临床诊断等领域得到了有效普及。近年来,随着食品安全事故频发,该技术在食品安全检测中得到快速广泛的应用。本文从免疫层析试纸技术的简介、研究、应用进展等方面进行综述,并对其发展前景进行评述,以期为免疫层析试纸技术的未来发展及应用提供参考。     

EXCEL规划求解在APN护理排班中的应用

结合一个简化的APN排班实例,介绍了一种使用EXCEL规划求解功能进行APN护理排班的方法。该方法具有使用简单,能直观显示排班情况,便于扩展约束条件,可以快速优化排班,排班结果人机交互调整方便的特点,具有很高的实用价值。文中也指出了该方法的限制条件并提出了解决思路。