浅淡施工作业现场习惯性违章的根源及综合治理措施

根据多年的作业现场施工和安全管理经验,本文对施工作业现场习惯性违章的根源进行了详细的分析,并提出了具有针对性的综合治理措施。     

虾青素调控ROS介导的自噬延长秀丽隐杆线虫寿命作用

本文研究了虾青素（Astaxanthin,AST）延长秀丽隐杆线虫寿命及其相关分子机制。观察AST对野生型（WT）线虫的寿命的影响,qRT-PCR检测WT线虫抗氧化（sod-3、ctl-1）和自噬相关基因（bec-1、lgg-1）的相对表达量,DCFH-DA荧光探针检测AST对WT线虫体内ROS（Reactive oxygen species）水平的影响,Western Blot检测AST对DA2123线虫LGG-1::GFP荧光蛋白表达的影响,胡桃醌诱导氧化应激后,qRT-PCR检测WT线虫在氧化应激的条件下bec-1、lgg-1的mRNA表达水平,进一步检测氧化应激状态下AST对线虫寿命的作用。结果表明,AST可延长WT线虫的寿命,上调sod-3、ctl-1、bec-1、lgg-1基因的mRNA表达水平,清除线虫体内的过多ROS,氧化应激状态下上调自噬水平,并延长线虫寿命。因此本研究认为,AST可能通过调节线虫体内ROS水平进而调控自噬从而延长线虫寿命。     

大肠杆菌色氨酸操纵子基因的克隆与表达

目的克隆并表达大肠杆菌色氨酸操纵子基因,提高其酶活性。方法利用PCR方法,从大肠杆菌31884基因组中直接克隆出色氨酸操纵子,并将其连接到原核表达载体pET-22b(+)中,构建重组质粒pET-22b(+)-Trpoperon,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导重组蛋白表达,表达产物经SDS-PAGE分析,并测定酶活性。结果凝胶电泳可见PCR扩增产物大小约为7000bp,SDS-PAGE鉴定目的蛋白分别得到了表达,邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的活性分别比对照提高了2.7和3.2倍。结论已成功构建了重组表达质粒pET-22b(+)-Trpoperon,邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的活性在大肠杆菌中得到了提高,为高产色氨酸基因工程菌的构建奠定了基础。     

叶酸对肌萎缩性侧索硬化症线虫TAR DNA结合蛋白43(TDP-43)毒性的改善作用

为探讨叶酸添加对TAR DNA结合蛋白43(TDP-43)毒性导致的肌萎缩性侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)治疗方面产生的作用,本文选用转入人TDP-43的转基因秀丽隐杆线虫作为受试生物,探究不同浓度叶酸(0.01 mmol/L、0.025 mmol/L、0.05 mmol/L)干预对线虫的寿命、生殖能力、瘫痪率、头部摆动频率、捕食能力与学习记忆能力的影响。结果显示,与对照组相比,0.025mmol/L组和0.05mmol/L组线虫寿命分别提高了22.48%和11.92%;0.025 mmol/L组线虫的生殖能力增加了25.26%;0.01mmol/L组和0.025 mmol/L组线虫的瘫痪率分别降低了20.19%与37.62%;0.025 mmol/L组线虫头部摆动频率在叶酸干预后的第2、4、6 d分别提高了17.14%、32.88%和39.18%;三个干预组线虫的捕食能力分别提高了24.58%、60.30%和15.85%,学习记忆能力也分别提高了36.84%、57.89%和31.58%,上述结果均具有统计学差异(p0.05)。而且,与0.01 mmol/L组和0.05 mmol/L组比较,0.025 mmol/L组线虫的瘫痪率显著下降,其他指标均显著增加,差异有统计学意义(p0.05)。以上结果表明,叶酸添加改善了ALS线虫中h TDP-43蛋白引起的毒性效应,并且0.025 mmol/L浓度的叶酸可能是ALS线虫最佳的干预剂量。