噬夏孢欧文氏菌(Erwinia uredovora)类胡萝卜素合成相关基因crtE的克隆及其在大肠杆菌中的表达

噬夏孢欧文氏菌基因crtE编码GGPP合成酶。通过PCR扩增获得crtE基因,克隆进表达载体,构建表达质粒pET-15bcrtE。重组质粒转化E.coli BL21（DE3）,构建工程菌;重组GGPP合成酶在大肠杆菌中实现了高效表达,表达量占菌体总蛋白的42%。重组蛋白以包含体形式存在,包含体经洗涤、尿素溶解、复性并经镍离子亲和层析树脂纯化,得到了电泳纯的重组噬夏孢欧文氏菌GGPP合成酶,带有His-tag的该蛋白分子量为34kDa,pI值为6.3。     

HPLC法测定辣椒红色素中苯甲酸的含量

建立了辣椒红色素中苯甲酸含量的高效液相色谱分析法。样品经亚铁氰化钾和乙酸锌溶液沉淀后,再依次经滤纸和0.45μm的滤膜过滤,滤液进行高压液相色谱分析,色谱柱为ODSC18柱,流动相为乙腈-乙酸铵溶液,流速为0.7 mL/min,检测波长为230 nm,该方法的回收率为98.2%~101.7%,相对偏差在1.56%~2.00%之间。此法不仅精密度高、准确而且操作非常方便。     

分光光度法测定苏叶中的迷迭香酸含量

建立了一种迷迭香酸的分光光度测定方法，迷迭香酸在50～300μg范围内与吸光度呈良好的线性关系。将该方法与液相色谱测定方法进行比较，二者测定结果差异不大。本方法可快速、简便、准确地测定苏叶中迷迭香酸的含量。     

不同培养条件对大肠杆菌工程菌产β-胡萝卜素的影响

将克隆了噬夏孢欧文氏菌类胡萝卜素合成相关基因crtE、crtB、crtI的重组质粒pET-15bcrtEIB和crtY的重组质粒pACYC-184crtY共转化E.coliBL21(DE3)构建工程菌.研究了碳源、氮源、金属离子、培养温度、光照、pH值、诱导时间等参数对工程菌生长及色素累积的影响,确定了合适的培养条件:培养基为改良LB培养基(蛋白胨10g/L、酵母提取物10g/L、可溶性淀粉5g/L、MgCl20.04g/L、FeCl3 0.01g/L、NaCI 10g/L,pH5.8),光照,起始培养温度为37℃,培养至OD600为0.6时加入IPTG至终浓度为0.5mmol/L,诱导温度降至28℃:诱导时间为12h.发酵完成后工程菌的生物量为7.32g dw/L,β-胡萝卜素的最高含量可达5.11mg/g dw.     

玉米黄素糖基化酶在大肠杆菌中的表达与纯化

噬夏孢欧文氏菌合成类胡萝卜素涉及的一系列反应都是在相关酶的催化下完成的,其中催化玉米黄素转化为玉米黄素二葡萄糖苷的玉米黄素糖基化酶由基因crt X编码。PCR扩增出噬夏孢欧文氏菌crt X基因,构建重组质粒,转化大肠杆菌。经镍离子树脂亲和层析、DEAESepharose FF离子交换层析纯化,得到了电泳纯的重组噬夏孢欧文氏菌玉米黄素糖基化酶,该重组蛋白在体外具有催化玉米黄素转化为玉米黄素二葡萄糖苷的活性。     

女贞子红色素的提取及其性质研究

通过酸水浸提,大孔吸附树脂吸附,对女贞子红色素进行了纯化,并对其稳定性进行了研究。结果表明,女贞子色素易溶于水和酒精,在酸性条件下稳定性良好,耐热性较好,常见金属离子如Ca2 、Ni2 、Cu2 、Mn2 、Fe2 等对其无不良影响,但氧化剂对色素的稳定性有较大影响。     

高纯度叶黄素的制备及稳定性研究

金盏菊萃取物20g,加入正丁醇40mL,密封搅拌均匀后(55℃),加入维生素C0 2g,再加入40mLw(NaOH)=20%的水溶液在70℃进行皂化反应8h。皂化物中加入400mL水,搅拌均匀后,过滤,得到叶黄素,w(C40H56O2)=94%。将其用V(CH2Cl2)∶V(CH3OH)=2∶1结晶,叶黄素质量分数可提高至w(C40H56O2)=98%,抗氧化剂、温度、光、氧气对叶黄素的稳定性具有重要影响。     

金盏菊中叶黄素的分离纯化及高效液相色谱的测定方法

金盏菊萃取物 15g ,加入 30mL正丁醇 ,密封搅拌均匀后 (5 5℃ ) ,加入 30mLw (NaOH) =2 0 %的水溶液 ,反应 7h(70℃ ) ;皂化物中加入 30 0mL水 ,搅拌均匀 ,过滤 ,然后依次用 30mL乙醇和 5 0mL正己烷冲洗 ,得到叶黄素 ,纯度为w (C4 0 H56O2 ) =71 2 %。确定了金盏菊中叶黄素的液相色谱测定方法 ,流动相为 V(CH2 Cl2 )∶V(CH3OH)∶V(CH3CN)∶V(H2 O) =32∶38∶2 9∶1,得到了叶黄素和 15种叶黄素酯的峰 ,叶黄素的保留时间为 3 6 81min ,叶黄素酯的保留时间分布为 4 5～ 12 .0min ;在流动相中它们的最大吸收波长都为 45 4nm。叶黄素的线性范围为 0 1～ 1.0 μg ,相关系数为γ =0 9998     

芝麻活性肽研究进展

芝麻是一种被广泛种植的油料种子作物,其深加工副产品——芝麻粕含有丰富的蛋白质,是获得芝麻活性肽的优质来源。文章综述近年来国内外对芝麻活性肽的制备、纯化、结构鉴定和生物活性的研究,并分析和展望芝麻活性肽的应用前景,为芝麻活性肽的研发和利用提供参考。     

无机盐和碳氮源对噬夏孢欧文氏菌积累类胡萝卜素的影响

供试的8种无机盐中，MgS04的单因子效应最好，可促进噬夏孢欧文氏菌（Erwinia uredovora）的生长和类胡萝卜素合成。在供试的4种碳源中，葡萄糖是最适碳源。噬夏孢欧文氏菌不能利用无机氮源，在供试的有机氮源中以酵母膏最有利于类胡萝卜素合成。培养基中的含碳量保持在2．45～4．90g／L，含氮量保持在1．60～2．40g／L时，对噬夏孢欧文氏菌生长和类胡萝卜素合成均为有利，培养基的最适C：N为2．5：1。类胡萝卜素稳定性的初步实验证明，所得到的类胡萝卜素丙酮溶液在常温下稳定性较差，容易分解。高效液相色谱法（HPLC）测定结果表明，从噬夏孢欧文氏菌细胞得到的天然色素成分比较复杂，在菌体中共检测到11种色素成分。