高粱原花青素四聚体干预Streptococcus mutans Ingbritt(c)体外黏附途径及机理

以高纯度高粱原花青素(sorghum procyanidins,SPC)混合物和高粱原花青素四聚体(sorghum procyanidins tetramers,SPC-Ⅲ)为原料,采用荧光标记的方法比较其抑制Streptococcus mutans Ingbritt(c)黏附效果,在此基础上结合双向凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)以及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-associated laser dissociation/ionization time of fl ight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)探究其干预S.mutans Ingbritt(c)黏附的主要途径并期望阐明其作用机理。结果表明:SPC-Ⅲ比SPC混合物抑制S.mutans Ingbritt(c)体外黏附的效果更强,SPC-Ⅲ处理细菌的抑制效果强于处理获得性膜的抑制效果,是其抑制细菌黏附主要途径;类葡萄糖基转移酶(glycosyltransferases,GTFs)活性蛋白(3.10-Ⅱ)经SPC-Ⅲ作用前后的2-DE图有明显差异,差异点均为S.mutans中的不同蛋白酶类,其中A24可能是一种新蛋白。     

变形链球菌UA159葡萄糖基转移酶B催化活性区的基因克隆及表达

为获得具有良好生物活性的可溶性葡萄糖基转移酶催化活性区(GTFB/CAT),根据NCBI上已发表的Streptococcus mutans UA159(血清型c)GTFB的DNA测序结果,按照GTFB/CAT两端的序列设计引物,利用PCR克隆技术钓取S.mutans UA159(血清型c)的GTFB/CAT基因,连入表达载体p ET-28b(+)中构成p ET-28b(+)-GTFB/CAT重组体,将重组载体转入大肠杆菌BL21(E.coil BL21)宿主菌中进行诱导表达,最佳诱导条件为37℃或30℃、4 h、诱导剂IPTG的浓度为1 mmol/L,产物经Ni2+-NAT树脂亲和层析纯化,得到了不可溶的GTFB/CAT包涵体,包涵体通过变性-复性最终得到可溶性蛋白,产物经SDS-PAGE分析表明,在44 ku处有一明显条带,与预期蛋白分子量一致,蛋白纯度约为80%,采用Somogyi法测得GTFB/CAT蛋白的比酶活为1.66 IU/mg。研究表明:成功克隆GTFB/CAT基因并通过在E.coil BL21原核体系中表达得到有生物活性的可溶性蛋白,为后续研究GTF的抗结剂及预防龋齿的效果及机理奠定了基础。     

高粱原花青素四聚体干预Streptococcus mutansIngbritt（c）体外黏附途径及机理

以高纯度高粱原花青素（sorghum procyanidins,SPC）混合物和高粱原花青素四聚体（sorghumprocyanidins tetramers,SPC-Ⅲ）为原料,采用荧光标记的方法比较其抑制Streptococcus mutans Ingbritt（c）黏附效果,在此基础上结合双向凝胶电泳（two-dimensional electrophoresis,2-DE）以及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（matrix-associated laser dissociation/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS）探究其干预S. mutans Ingbritt（c）黏附的主要途径并期望阐明其作用机理。结果表明：SPC-Ⅲ比SPC混合物抑制S. mutansIngbritt（c）体外黏附的效果更强,SPC-Ⅲ处理细菌的抑制效果强于处理获得性膜的抑制效果,是其抑制细菌黏附主要途径;类葡萄糖基转移酶（glycosyltransferases,GTFs）活性蛋白（3.10-Ⅱ）经SPC-Ⅲ作用前后的2-DE图有明显差异,差异点均为S. mutans中的不同蛋白酶类,其中A24可能是一种新蛋白。