疫苗效价检测方法的研究

本文对现行疫苗效价的检测方法及其要求进行了分析,并对新的检测方法,如假病毒中和试验、转基因动物实验和实时定量PCR在效价检测中的应用进行了介绍。     

HIV抗体酶联免疫诊断试剂批内和批间精确性分析

目的　了解HIV抗体酶联免疫试剂批内和批间的精确性。方法　用同一批试剂多次检测同一样品和不同批次试剂分别检测同一样品 ,分别计算其批内和批间的变异系数 (CV) ,分析试剂的批内和批间的精确性。结果　用 1份样品对12家试剂的批内精确性分析结果显示 ,所有试剂的批内变异系数均在 15 %以内 ,符合要求 ,但不同试剂的变异系数不同 ,且有统计学差异。用 5份样品对 12家不同批次试剂的批间变异系数进行分析 ,在所得到的 6 0个变异系数中 ,仅有 3个变异系数小于或等于 15 % ,大部分试剂的批间变异系数均在 2 0 %以上。结论　HIV抗体酶联免疫试剂的批间精确性变异较大 ,其批间稳定性有待进一步提高。     

乙型肝炎病毒s基因变异株抗原表位的研究

对HepG2细胞表达的HBsAg的点突变体129Ha、142Lf、145Rb、143Sg和148及野生型HBsAgb3进行了初步纯化及抗原表位的研究，发现这些突变体的颗粒密度与野生型HBsAg差异无显著意义，约为1．2；用5种HBsAga决定簇的单克隆抗体对其表位进行分析，发现129Ha、142Lf、145Rb和142Sg与这5种单抗的结合力与野生型HBsAg差异大显著意义，但148突变体的表位与野生型HBsAg明显不同，其原因还有待进一步研究。     

检测戊型肝炎病毒核酸的实时荧光聚合酶链反应法的建立

目的建立一种能快速、敏感地检测戊型肝炎病毒(HEV)核酸的实时荧光聚合酶链反应法(Real-timeRT-PCR)。方法基于HEVORF3保守区序列,设计引物和探针,从22对引物和4条探针中进行筛选,并对选出的引物和探针的浓度、反应体系、反应条件、核酸抽提方法等进行优化。采用常规套式RT-PCR和本研究建立的实时荧光RT-PCR检测不同样品,比较两种方法的特异性和敏感性。结果优化出1对引物和探针的组合。优化的30μl反应体系中,上、下游引物浓度均为0.10mmol/L,探针浓度为0.20mmol/L,Taq酶的浓度为3U,AMV逆转录酶浓度为2U。优化的反应条件为:50℃30min;95℃3min;95℃10s,50℃30s,72℃60s,5个循环;95℃10s,57℃40s,40个循环。初步检测结果显示,该方法与常规套式RT-PCR特异性符合率为100%,两种方法检测HEV1型样品的敏感性均为104,检测人和猪的HEV4型样品时,实时荧光RT-PCR敏感性均为104,明显高于常规套式RT-PCR的103和102。结论所建立的检测HEV核酸的实时荧光聚合酶链反应法具有简便、快速、敏感性较高以及不易被污染等优点,具有一定的临床应用潜力。     

不同HIV抗体检测试剂检测抗HIV-1膜蛋白抗体的敏感性

目的分析不同HIV抗体检测试剂检测HIV-1B’和BC重组型膜蛋白抗体的敏感性。方法选择HIV-1B’和BC重组型感染者血浆,用gp41抗原和gp160抗原分别进行亲和层析纯化。将各纯化产物进行系列稀释,用15种HIV抗体ELISA检测试剂以及3种HIV抗原/抗体联合检测试剂进行检测。结果用gp41抗原纯化后的样品只含有抗gp160和gp41的抗体带型,而用gp160抗原纯化后的样品含有抗gp160、gp120和gp41的抗体带型。进口试剂检测不同基因型样品的敏感性低于大部分国产试剂,国产试剂检测不同基因型的样品的敏感性无明显差异,而进口试剂检测B’亚型抗体的能力低于检测BC重组型抗体的能力。结论不同基因型的抗体对HIV抗体检测试剂的敏感性可能有一定的影响。     

人乳头瘤病毒疫苗制检规程研讨会简介

世界卫生组织（WHO）于2006年3月24～25日，在瑞士日内瓦总部召开了“关于制定人乳头瘤病毒（HPV）疫苗制检规程的讨论会”，参加会议的有从事HPV研究的科学家、HPV疫苗管理及评价的专家以及生产单位代表．共计30余人。会议的主要目的是了解目前HPV疫苗的研究进展，并制定HPV疫苗制检规程提纲，为进一步完成HPV疫苗制检规程的制定奠定基础。     

乙型肝炎病毒S基因变异株的研究

目的　对７份ＨＢｓＡｇ诊断试剂检测结果不一致的样品进行确证并分析其原因。方法采用套式 ＰＣＲ法对７份样品进行ＤＮＡ扩增,并将阳性产物克隆到ｐＧＥＭ－Ｔｅａｓｙ载体上,然后进行测序并对其序列进行分析。 结果　７份样品中６份为ＨＢＶ　ＤＮＡ阳性,其中５份与Ａｂｏｏｔｔ和Ｏｒｔｈｒｏ　ＨＢｓＡｇ试剂无反应或反应较弱,而且其ａ决定 簇的氨基酸均在１３４位发生改变,由Ｆ变为 Ａ;１份与 Ａｂｂｏｔｔ和Ｏｒｔｈｒｏ ＨＢｓＡｇ试剂反应较强,其ａ决定簇的氨基酸也 在１３４位发生改变,但由Ｆ变为Ｓ。结论　国内外首次报道ＨＢｓＡｇ ａ决定簇１３４位由 Ｆ变为 Ａ后,其抗原性明显降 低,不易被ＨＢｓＡｇ试剂检出;而１３４位由对变为 Ｓ后,其抗原性无明显改变。     

戊肝病毒(HEV)IgG抗体酶联免疫试剂盒的质量分析

由于戊型肝炎病毒研究的快速发展,近年来已有数家试剂厂研制生产出ＨＥＶＩｇＧ抗体酶联免疫试剂（ＥＬＩＳＡ）,极大地促进了该病毒的研究工作。作为一种新型试剂,它的质量如何,除用国家参比品检定外,还应进一步进行临床考核,为此我们挑选了３家该试剂（其中Ａ为进口,Ｂ、Ｃ为国产试剂）,分别对不同人群进行检测,分析比较其灵敏度的特异性。 １．经Ａ、Ｂ、Ｃ ３家试剂分别检测,健康人群中（１６２人）ＨＥＶ　ＩｇＧ抗体的阳性率分别为：２２．８％、４．９％、８．０％ ;散发肝炎病人中（２６９人）ＨＥＶ ＩｇＧ抗体的阳性率…     

戊型肝炎病毒ORF2N-端和C-端多肽的抗原性分析

目的分析戊型肝炎病毒(HEV)ORF2N-端和C-端多肽的抗原性。方法以纯化的4型HEVORF2N-端1～124aa多肽pS4-1和4型HEVORF2C-端385～674aa多肽pS4-6分别包被微孔板,采用间接酶联免疫法(EIA)检测感染HEV的猴系列血清中的抗HEVIgG抗体,分析两种多肽的抗原性,并与进口试剂的检测结果进行比较。结果在感染HEV的猴系列血清中,针对HEVORF2N-端抗原的抗体产生时间早,持续时间短,其峰值与转氨酶(ALT)的峰值几乎重叠;针对HEVORF2C-端抗原的抗体在HEV感染早期产生的滴度较低,但逐渐升高,在14周的观察期内,抗体滴度几乎无下降趋势。用两种多肽检测HEVIgG抗体的灵敏度均高于进口试剂。结论两种多肽均具有较好的抗原性,但在HEV感染的不同时期,其反应性不同。     

HIV疫苗小鼠免疫原性检测方法的初步建立

目的初步建立HIV疫苗小鼠免疫原性检测方法,并对HIV疫苗进行免疫原性评价。方法选择一种HIVDNA疫苗(D)、2种重组痘苗载体HIV疫苗(M和R),分别免疫BALB/c小鼠,6周后分离血清和脾淋巴细胞,采用ELISOPT和胞内因子染色法检测细胞因子分泌情况,MTS法检测淋巴细胞增殖反应,ELISA法检测血清中抗-HIVIgG和IgA抗体水平。结果D、M和R疫苗均可诱导小鼠产生广泛的免疫应答,ELISPOT法可检出脾细胞分泌IFNγ、IL-2、IL-4和IL-6;胞内因子染色可检出IFNγ、IL-2和IL-4的分泌;D和M组脾淋巴细胞增殖试验阳性数高于R组;D、M和R组血清抗-HIVIgG抗体分别有0/5、1/5和5/5小鼠阳转,各组均未检出血清抗-HIVIgA。结论已初步建立了HIV疫苗小鼠免疫原性检测方法。