SYNAPT G2 HDMS高清质谱性能特点及应用简介

SYNAPT~(TM) G2 HDMS质谱分析系统是沃特世公司第二代基于高效离子淌度(ion mobility spectrometry,IMS,也称离子迁移)技术的高性能四极杆-飞行时间质谱仪。通过两种技术的结合与升级,SYNAPT G2 HDMS不仅能按离子的质荷比分离检测,还可根据离子的大小、形状等将其分离。因此,此质谱系统不但可以提高传统质谱数据的准确性,更可以提供样品形态信息,从而得到样品活性、结构状态等信息。其在蛋白组学、代谢组学、糖及脂类分析、医学标志物发掘、药物开发与质控、食品安全检测、环境安全检测等方面有着广泛的应用空间,并已经表现出良好的性能优势,成为各领域工作者的有力的分析工具。本文简要介绍该系统的性能特点及应用。     

微生物转谷氨酰胺酶生产菌的“神舟四号”飞船搭载育种研究——搭载前地面育种试验(I)

结合“神舟四号”无人飞船的试验条件和具体搭载要求 ,对转谷氨酰胺酶生产菌株Streptomycessp .WZFF .L -M 1(酶活 1.74U/mL)的孢子和菌丝体以 1 甲基 3硝基 1 亚硝基胍 (NTG)分别进行多种地面模拟比较性的诱变育种试验 ,发现诱变处理后菌落的形态变异等特征与产酶能力相关 ,经初筛和复筛的菌种驯化选育 ,获得具优异性能的突变菌株 ,酶活得到了明显提高     

微生物谷氨酰胺转胺酶的分批发酵生产

在首先采用我们自行设计的2L小型、便易的生化反应器,对我们研究室保藏的高产酶菌株链霉菌(Streptomyces sp.)WZFF.L-M168发酵生产微生物谷氨酰胺转胺酶(MTG)过程中发酵培养基的碳源、氮源和初始pH值的影响作用进行研究,确定培养条件后,逐级扩大发酵罐规模,在20L和200L发酵罐上以在线监控技术手段直接监测分析环境因素对MTG发酵生产的作用效果,确立各级发酵罐分批发酵的生产工艺条件。结果表明:碳氮源采用葡萄糖、淀粉和多价胨,初始pH值为7.0,接种量5%～10%,发酵过程中在线控制培养温度、pH、通气量和搅拌速度等各项参数指标分别为30±0.5℃、6.6～6.9,0.8～1.1vvm和200～400r/min较为适宜。在这优化技术条件下,200L发酵罐可以稳定生产酶活在2.75U/ml以上的MTG。     

微生物转谷氨酰胺酶生产菌的"神舟四号"飞船搭载育种研究——搭载前地面育种试验(Ⅰ)

结合"神舟四号"无人飞船的试验条件和具体搭载要求,对转谷氨酰胺酶生产菌株Streptomyces sp.WZFF.L-M1(酶活1.74 U/mL)的孢子和菌丝体以1-甲基-3硝基-1-亚硝基胍(NTG)分别进行多种地面模拟比较性的诱变育种试验,发现诱变处理后菌落的形态变异等特征与产酶能力相关,经初筛和复筛的菌种驯化选育,获得具优异性能的突变菌株,酶活得到了明显提高.     

链霉菌生产谷氨酰胺转胺酶的发酵工艺条件研究

以本实验室从土壤分离并经诱变筛选得到的链霉菌 Streptomyes sp.WZFF.W—12.var MN-35为出发菌株, 首先在摇瓶条件下,对微生物谷氨酰胺转胺酶(MTG)发 酵生产过程中的主要培养基组成、培养条件及各种蛋白 酶抑制剂对菌体生长和产酶能力的影响进行了研究。结 果表明,发酵生产MTG的合适碳氮源分别为可溶性淀 粉与葡萄糖和多价胨,其最佳碳氮比(C/N)为5:5,适宜 的接种龄、接种量、初始pH、培养温度、搅拌速度等工艺 条件分别为24h、7％～10％、pH6.5～7.0、30℃和200r/min, MTG酶活最高可达1.63U/mL。当在优化培养基中进一 步加入一种蛋白酶抑制剂后,酶活又提高了19.0％。在这 些最佳工艺条件下采用简易的小型生化反应器培养该链 霉菌株,酶活稳定在2.0U/mL以上。     

链霉菌WZFF.L-M1搭载"神舟"四号飞船的空间育种效果

生产微生物谷氨酰胺转胺酶(MTG)链霉菌WZFF.L-M1(酶活2.62U/mL)的孢子和斜面培养菌体搭载“神舟”四号无人飞船,并在斜面中添加诱变剂亚硝基胍(NTG)。实验发现,搭载菌株的菌落形态发生变异,并与产酶能力有一定相关。通过对搭载菌株的初筛与复筛的菌种选育驯化,获得一系列产酶能力大幅度提高的优良突变菌株。其中的3株性能优异,遗传性状稳定,产酶活力提高了30%以上,能够稳定发酵生产高于3.5U/mL的MTG,集中体现了航天飞船搭载的空间诱变育种技术效果。     

微生物谷氨酰胺转胺酶高产菌株的诱变选育

以本实验室筛选的Streptomyces sp.WZFF.W—12(谷氨酞胺转胺酶活0．24U／ml)为出发菌株，孢子经预培养处理处于萌发状态后制备成单孢子悬浮液，用1—甲基—3—硝基—1—亚硝基服(NTG)单独和结合羟胺进行多次复合诱变处理。实验发现，诱变处理后菌落的形态变异等特征与产酶能力呈相关关系，并被用于最初的突变菌落挑选。接着先后采用蛋白质交联凝絮—沉淀性能分析的初筛试验和摇瓶测定酶活的复筛试验分离选育高产酶突变菌株，最后获得一产酶活力达2．18U／ml的高产菌株W—12var HZ3，酶活相对提高了8倍。对该菌株进行分类鉴定方面的理化性能测试和传代实验结果表明，该菌遗传性较为稳定，而且其理化性能与已报道的产酶菌种明显不同。     

土壤分离转谷氨酰胺酶生产菌株

根据转谷氨酰胺酶催化反应结果的特性 ,设计了一个利用廉价的酶作用底物实施的蛋白质交联凝絮 -沉淀性能测定方法 ,并将其作为初筛手段 ,用于从土壤中分离生产转谷氨酰胺酶微生物菌种。从 13 9株放线菌中经初筛和摇瓶发酵测定酶活的复筛试验筛选得到 10株产酶菌株 ,其中一株酶活达 0 2 4U/mL ,并对其进行分类鉴定实验 ,确定为链霉菌属 ,编号为Streptomycessp .WZFF .W 12。     

产转谷氨酰胺酶链霉菌的发酵罐生产工艺研究

针对研究室分离筛选的链霉菌 (Streptomycessp )WZFF W 12 varMN 3 5发酵生产微生物转谷氨酰胺酶 (MTG) ,首先采用自行设计的 2L小型生化反应器 ,研究以多价胨为主的有机氮源的影响作用 ,并在此基础上逐级扩大发酵罐规模 ,以 8L小型罐及 2 0～ 2 0 0L发酵罐组合并利用在线监控手段直接监测分析环境条件对MTG发酵过程中菌体生长和产酶的影响 ,进一步确定培养条件。研究结果表明 ,以 2 0 0L发酵罐发酵生产MTG时采用两级种子培养 ,氮源采用多价胨和豆饼粉 ,发酵过程中在线控制通气量和搅拌速度分别为 0 9～ 1 1vvm和 3 5 0～ 45 0r/min等优化条件最有利于菌体持续稳定生产MTG ,当发酵至 72h时酶活达到最高 ,在 2 15u/mL以上