鲍鱼内脏中天然牛磺酸的提取与检测

目的以皱纹盘鲍内脏为原料,优化高纯度牛磺酸的提取工艺,并建立用高压液相色谱检测牛磺酸纯度的方法。方法经水煮、乙醇抽提、蒸发浓缩、沉淀、活性炭处理、结晶等步骤,获得高纯度天然牛磺酸。用高压液相色谱检测牛磺酸纯度的方法为:色谱柱:Discovery C18;流动相:甲醇-0.05 mol/L乙酸钠缓冲液(pH 5.3)(v/v,50:50);流速:1 mL/min;检测波长:330 nm;柱温:室温。结果该提取工艺能从1 kg鲍鱼内脏中提取得到天然牛磺酸3.07 g。采用该检测方法,牛磺酸的出峰时间为6.037 min,在1~20μg/mL浓度范围内线性关系良好(R2=0.9999),最低检出限为0.03μg/mL,最低定量限为0.12μg/mL,样品测定的平均回收率为99.44%(RSD=0.25%),方法的精密度和稳定性好(RSD1%),用该方法检测提取得到的牛磺酸纯度为96.06%。采用红外光谱法(IR)对提取得到的鲍鱼内脏牛磺酸进一步作结构鉴定,发现它与标准品的红外特征吸收峰一致。结论获得了高纯度牛磺酸的提取工艺。本方法精密度和稳定性好,回收率高。     

利用对虾消化腺丝氨酸蛋白酶制备鲍鱼外套膜ACE抑制肽

利用鲍鱼加工副产物外套膜制备具有抑制血管紧张素转移酶（angiotensin converting enzyme,ACE）活性的生物活性肽,为鲍鱼加工副产物的高值化利用提供新思路。采用从凡纳滨对虾消化腺中制备的丝氨酸蛋白酶,酶解皱纹盘鲍外套膜蛋白,以酶解物ACE抑制活性为评价指标优化条件。酶解液通过3 kDa超滤膜后,活性组分经过Superdex peptide 10/300 GL凝胶过滤柱和反相高效液相色谱（reversed-phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC）分离纯化,利用液相色谱-质谱（liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS）鉴定纯化肽的氨基酸序列。结果显示,酶解液的ACE抑制率为13.42%,经3 kDa超滤膜初步分级后,相同浓度下,小于3 kDa的组分ACE抑制率为53.25%。经凝胶过滤柱和反相高效液相色谱柱进一步分离后,从ACE抑制活性最高的峰中鉴定得到5个肽段,序列为LGDSFYYGK、LVNEVTEFAK、VDEVGGEALGR、MFLSFPTTK、VATVSLPR,说明活性峰是多肽混合物。本研究利用鲍鱼外套膜制备ACE抑制肽,可以为鲍鱼及对虾加工副产物的高值化利用提供理论参考。     

利用牡蛎制备DPP-IV抑制肽及其活性分析

以牡蛎肉为原料制备二肽基肽酶-IV（dipeptidyl peptidase-IV,DPP-IV,EC 3.4.14.5）抑制肽。通过对比5 种蛋白酶（木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、胰酶、中性蛋白酶和复合蛋白酶）制备的酶解液对DPP-IV的抑制活性,发现胰酶制备的酶解液对DPP-IV抑制效果最好。通过优化胰酶酶解条件,确定最优酶解条件为加酶量0.8%、pH 8.0、温度37 ℃,酶解时间90 min。酶解液经超滤、Sephadex G-15和高效液相色谱分离纯化,获得肽片段。通过质谱鉴定筛选得到2 种肽段的序列为Glu-Ile-Thr-Ala-Leu-Ala-Pro-Ser-Thr-Met-Lys（EITALAPSTMK）和Ile-Leu-Ala-Pro-Pro-Glu-Arg（ILAPPER）。利用BIOPEP在线模拟分析了这2 个肽的胃肠液消化特性。采用固相合成法合成肽段APSTM和ILAPPER,并应用于DPP-IV抑制活性研究。结果显示,2 个肽段的IC50值分别为354.81 μmol/L和16.98 μmol/L。分子对接结果表明,抑制肽与DPP-IV的活性部位主要以氢键、范德华力和π键相互作用为主。本研究通过酶解牡蛎肉制备高抑制活性的DPP-IV抑制肽,为以牡蛎为原料的功能性食品开发利用提供了理论基础。     

虾夷扇贝肌肉丝氨酸蛋白酶的研究

为了探究虾夷扇贝肌肉冷藏过程中内源蛋白酶对其质构的影响,本文对虾夷扇贝肌肉在4 ℃下冷藏7 d过程中肌肉质构及蛋白变化进行测定,结果表明,整个冷藏过程中扇贝肌肉硬度、弹性、咀嚼性和粘性整体呈下降趋势。SDS-PAGE分析显示肌肉蛋白在第3 d开始出现明显降解。在内源酶活力方面,丝氨酸蛋白酶（Serine proteinase,SP）活力在冷藏2 d后开始急剧下降。通过硫酸铵盐析、离子交换、凝胶过滤和疏水柱层析等从虾夷扇贝肌肉中获得高度纯化的丝氨酸蛋白酶并对其酶学性质进行研究。SDS-PAGE和明胶酶谱结果表明,SP在天然状态下主要以分子量约为52 kDa的二聚体形式存在。SP的最适pH为9.0,最适温度为37 ℃。SP特异性水解羧基侧P₁位含有精氨酸或赖氨酸残基的底物。丝氨酸蛋白酶特异性抑制剂PMSF、Leupeptin、Pefabloc SC、Benzamidine分别能抑制其97%、98%、90%和85%的酶活力;金属离子Fe2+、Zn2+、Cu2+也能明显抑制SP的酶活力。37 ℃下SP可有效降解扇贝肌原纤维蛋白,为揭示SP对扇贝肌肉蛋白的品质影响提供参考。     

流产的重炮

试射 1976年6月29日下午，在美国加利福尼亚州圣克莱蒙特岛以南，弗雷斯特·谢尔曼级驱逐舰“赫尔”号（DD-945）正在慢速航行。和其它同型舰相比，“赫尔”号首部的MK42型单管127毫米舰炮被一种新型火炮所取代。