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1.
目的建立四重荧光定量PCR体系鉴定肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌以及伤寒沙门氏菌。方法针对沙门氏菌属特异性ompC基因、肠炎沙门氏菌sdf基因、鼠伤寒沙门氏菌STM4495和伤寒沙门氏菌STY2021序列设计引物和TaqMan探针,建立多重荧光定量PCR体系,进行特异性与敏感性研究。结果 28株不同血清型的沙门氏菌均扩增出ompC基因,其他13株非沙门氏菌均未出现ompC的非特异性扩增。sdf、STM4495、STY2021的探针和引物分别特异性扩增出肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌以及伤寒沙门氏菌,而25株其他血清型沙门氏菌以及13株非沙门氏菌均未见扩增曲线。敏感性试验显示,该体系的最低检测限分别为48 pg/mL(ompC)、560 pg/mL(sdf)、530 pg/mL(STM4495)、35 pg/mL(STY2021)。结论该方法特异好、灵敏高、能够快速检测沙门氏菌并鉴定肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌以及伤寒沙门氏菌。  相似文献   
2.
目的建立水产品中副溶血弧菌和霍乱弧菌合检方法,并对合检方法对比进行评价。方法利用副溶血弧菌和霍乱弧菌阳性菌株,制备纯菌液、不同浓度梯度的人工污染样品。通过对30份纯菌液、30份人工污染样品和250份实际样品的检测,将建立的合检方法与行业标准(SN/T 1022-2010进出口食品中霍乱弧菌检验方法和SN/T 0173-2010进出口食品中副溶血性弧菌检验方法)进行比较,对合检方法进行效果评价。结果实验结果表明副溶血弧菌和霍乱弧菌合检方法,与行业标准检测结果完全一致。结论该方法可靠,对实验仪器和操作人员的要求低,具有良好的实用性,适合基础检测实验室。  相似文献   
3.
建立环介导等温扩增技术(LAMP)同时快速检测水产品中副溶血性弧菌和霍乱弧菌的方法。针对副溶血性弧菌tox R和霍乱弧菌omp W基因设计特异性引物,优化反应条件,建立水产品中副溶血性弧菌和霍乱弧菌的检测方法,并同时应用双重LAMP技术和PCR技术对实验菌株进行副溶血性弧菌和霍乱弧菌检测,比较两种方法的特异性和灵敏度。LAMP的最佳反应温度为61℃,在此条件下,双重LAMP检测技术检测副溶血性弧菌和霍乱弧菌DNA的敏感度可达3.12 fg,且与其他常见的细菌株无交叉反应,特异性为100%;对模拟食品样品进行直接检测时检测限为50 cfu/m L;对60份水产样品进行检测时,6份样品出现LAMP及PCR阳性,而传统培养方法检测出4份阳性。实验结果表明所建立的双重LAMP技术在检测水产品中副溶血性弧菌和霍乱弧菌时灵敏度、特异性高,时间成本低,适合于水产品中副溶血性弧菌和霍乱弧菌的快速检测。  相似文献   
4.
根据编码金黄色葡萄球菌肠毒素A的sea基因、编码耐热核酸酶的nuc基因为目的基因,设计两对特异性引物,利用聚合酶链式反应结合变性高效液相色谱技术,建立水产品中金黄色葡萄球菌的双重PCR-DHPLC检测方法。以30株参考菌株进行特异性实验,除所试8株金葡菌出现目的片段和阳性吸收峰外,其余菌株均未检测到目的片段与阳性吸收峰,表明该方法具有良好的特异性。灵敏性实验结果表明,检测灵敏度达到菌液浓度50CFU/mL,比普通的凝胶电泳高一个数量级。利用建立的双重PCR-DHPLC检测方法对240份水产品进行检测,共检出22株金黄色葡萄球菌,检出率为9.2%,其中含有肠毒素基因有8株,占总样本的3.3%,与国标法检出阳性率比较无显著差异,证明该方法具有良好的实用性。实验证明,本研究建立的双重PCR-DHPLC方法不仅可以特异、灵敏、简便快速且高通量的实现对水产品中金葡菌的检测,而且也可通过对肠毒素基因的分析,方便地判断出该菌株致病性的强弱。  相似文献   
5.
[目的]研究不同因素对冷冻虾仁抑菌效果的影响。[方法]用微生物方法检测冷冻虾仁生产中常用添加剂的抑菌效果。并以BRIFISOL512NEW虾仁添加剂为主要研究对象,对添加剂浓度、虾仁规格以及浸泡时间分别做单因素实验。[结果]虾仁中主要产生抑菌效果的是含多聚磷酸盐添加剂。单因素实验表明,同一浸泡浓度,大规格虾仁抑菌效果明显高于小规格;浸泡时间越长,抑菌效果越好。当浸泡时间超过4h后,抑菌效果增强不明显;在添加剂浓度小于3%时,不会产生抑菌圈阳性(≤2mm),大于3%会产生抑菌圈阳性。[结论]添加剂浓度、虾仁规格、浸泡时间对抑菌效果均有影响。  相似文献   
6.
研究了β-胡萝卜素氧化降解产物的生理活性。对利用OsO4为催化剂,将β-胡萝卜素在OsO4-H2O2-Ether体系中进行控制型氧化降解,对氧化降解产物进行薄层分离后,采用体外细胞培养技术观察β-胡萝卜素氧化降解产物对Hela细胞以及bel-7402细胞增殖的影响。结果发现,β-胡萝卜素氧化降解产物在高浓度时对Hela以及bel-7402的抑制作用强于β-胡萝卜素的,且对bel-7402的作用强于对Hela的,显示β-胡萝卜素氧化降解产物对癌细胞的增殖有抑制作用。  相似文献   
7.
目的建立检测海产品中副溶血性弧菌、沙门菌和单增李斯特菌的多重荧光定量PCR体系。方法针对副溶血性弧菌tlh基因,沙门菌Ompc基因和单增李斯特菌hly基因设计引物和Taq Man探针,建立多重荧光定量PCR体系,进行特异性与敏感性研究;利用该体系检测海产品中的副溶血性弧菌、沙门菌和单增李斯特菌。结果副溶血性弧菌、沙门菌和单增李斯特菌可得到特异性扩增,而共存于海产品中的其他细菌均未见扩增曲线。敏感性试验显示,该体系对副溶血性弧菌、沙门菌和单增李斯特菌的最低检测限分别为72、40、80 cfu/ml。对舟山采集的150份样品进行检测,检出32份副溶血性弧菌、11份沙门菌、5份单增李斯特菌,与国标法检测结果一致。结论本研究建立的基于Taq Man探针的多重荧光定量PCR检测方法可以特异、灵敏、简单快速地实现对海产品中副溶血性弧菌、沙门菌和单增李斯特菌的检测。  相似文献   
8.
目的 建立海捕虾中4-己基间苯二酚(4-hexylresorcinol,4HR)的分光光度检测方法。方法 用乙腈-二氯甲烷溶液提取4HR,经氨基固相萃取柱净化,4HR与固蓝RR盐在碱性介质中反应生成红色偶合产物,进行比色定量。结果 本方法在0~90 μg/mL 范围内具有良好的线性,相关系数Adj. R2=0.9998,其检出限和定量限分别是1.0188 μg/mL和3.0873 μg/mL。3个不同加标水平(0.5、1.0、2.0 μg/g)的平均回收率为86.30~93.25%,相对标准偏差为1.57~5.54%。本方法与现行标准GB 5009.280-2020进行比对,两种方法检测结果无显著性差异(P>0.05)。结论 本法灵敏、准确可靠、检出限和定量限低,可用于海捕虾中4HR分析检测。  相似文献   
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