偏甘油酯脂肪酶PrLip的重组表达及酶学性质表征

偏甘油酯脂肪酶因其独特的底物偏好性具有广阔的应用前景。研究从食品安全菌娄地青霉的基因组中发现了一个假定的偏甘油酯脂肪酶prlip基因,通过全基因合成技术获得该酶基因序列,并构建了PrLip组成型表达的毕赤酵母基因工程菌。工程菌在30℃发酵培养60 h,发酵活力达到22.26 U/mL。利用阴离子交换层析法纯化,获得纯度大于90%的脂肪酶PrLip。酶学性质研究发现该酶的最适反应温度为45℃,最适反应pH值为7.0,40℃的半衰期为6 h,水解及酯化反应证实PrLip是一种偏甘油酯脂肪酶。脂肪酶PrLip具有良好的温度耐受性及对大多数表面活性剂的耐受性,使其具有广阔的工业应用前景。     

橄榄二酯油烘焙苏打饼干中3-氯丙醇酯、缩水甘油酯产生规律及其质构分析

以橄榄甘油二酯油为原料,制作苏打饼干,考察甘油二酯（diglycerides,DAG）含量、烘焙温度、盐添加量、烘焙时间对饼干中3-氯丙醇酯（3-monochloropropane-1,2-diol esters,3-MCPDE）和缩水甘油酯（glycidyl esters,GE）及饼干硬度和黏度的影响。结果表明,苏打饼干中3-MCPDE和GE的最高含量分别为1.05 mg/kg和0.37 mg/kg,且烘焙过程中3-MCPDE含量与烘焙温度和盐添加量呈正相关,在170 ℃以上时GE含量随烘焙温度升高而增加。但烘焙时间和DAG质量分数对3-MCPDE和GE的产生无显著影响（P＞0.05）。综上,橄榄甘油二酯油应用于烘焙苏打饼干具有良好的安全性和改善产品质构的效果,同时控制烘焙温度和盐添加量能在一定程度降低苏打饼干中3-MCPDE和GE的含量。     

天然抗氧化剂对亚麻籽甘油二酯油氧化稳定性的影响

为提高亚麻籽甘油二酯油的氧化稳定性,研究了抗坏血酸棕榈酸酯、迷迭香提取物和维生素E及其组合对亚麻籽甘油二酯油的抗氧化作用。以氧化诱导时间为响应值,在单因素实验基础上,通过响应面分析确定最优的抗氧化剂组合。考察了优化的抗氧化剂组合对亚麻籽甘油二酯油高温加热时反式脂肪酸含量的影响。结果表明：相较于单一的维生素E、迷迭香提取物和抗坏血酸棕榈酸酯,三者组合能显著提高亚麻籽甘油二酯油的氧化稳定性;最优抗氧化剂组合为抗坏血酸棕榈酸酯添加量84 mg/kg、迷迭香提取物添加量405 mg/kg、维生素E添加量1 808 mg/kg,在此条件下亚麻籽甘油二酯油的氧化诱导时间为11.13 h,是空白对照的6.79倍;该抗氧化剂组合能抑制油中反式脂肪酸的生成。天然抗氧化剂绿色、安全,可有效提高亚麻籽甘油二酯油的氧化稳定性。     

天然低共熔溶剂对绿色荧光蛋白的保护作用

天然低共熔溶剂(natural deep eutectic solvent,NADES)是一种新型的绿色环保溶剂,可应用于天然活性物质的提取及生物催化。本研究以绿色荧光蛋白(green flurescent protein,GFP)为模式蛋白,探究了不同NADES对GFP在70℃下的稳定性的影响,发现氯化胆碱-山梨醇(Choline chloride sorbital,CS)对GFP在70℃的热处理下荧光保留率最好;并探究了不同含水量的CS天然低共熔溶剂对GFP稳定性的影响,发现在含水量为40%的CS天然低共熔溶剂中GFP的稳定性最佳;同时发现在含水量为40%的CS天然低共熔溶剂体系下的GFP可以提高对SDS的耐受性,但对H2O2的耐受性的提高不明显;CS天然低共熔溶剂也有利于提高脂肪酶AOL在45℃下的的热稳定性。综上CS天然低共熔溶剂对蛋白质有良好的保护作用,在食品加工及生物催化领域具有潜在的应用前景。     

单、双甘油酯脂肪酶催化酯化合成高纯度山茶籽油丙二醇单酯

为了提高丙二醇酯合成中的单酯比例,以山茶籽油脂肪酸为原料,以单、双甘油酯脂肪酶Lipase AOL、Lipase G Amano 50为催化剂酯化合成丙二醇单酯,考察了加酶量、反应温度、底物物质的量比以及摇床转速对酯化反应合成丙二醇单酯的影响,并对产物进行了鉴定,与Lipase SMG1-F278N催化酯化效果进行了比较。结果表明,Lipase AOL、Lipase G Amano 50催化酯化合成丙二醇单酯的最佳反应条件为Lipase AOL加酶量80 U/g、底物（山茶籽油脂肪酸与丙二醇）物质的量比1∶4,Lipase G Amano 50加酶量100 U/g、底物物质的量比1∶2,反应温度35℃,摇床转速180 r/min,反应时间18 h,在此条件下Lipase AOL、Lipase G Amano 50催化酯化合成的丙二醇单酯含量分别达到85.55%和72.98%。经GC-MS鉴定合成的丙二醇单酯主要由丙二醇单油酸酯、丙二醇单棕榈酸酯和丙二醇单亚油酸酯组成。与Lipase G Amano 50、Lipase SMG1-F278N相比,Lipase AOL催化酯化合成的丙二醇单酯含量和纯度更高,更适合作为丙二醇单酯的催化合成用酶。     

荧光定量PCR检测霉变烟叶中米曲霉方法的建立

为建立快速高效的烟草霉变微生物定量与定性的检测方法,本研究针对陈旧烟叶中分离的米曲霉的rDNAITS1基因片设计一对特异引物,制备含ITS1基因的重组质粒作为阳性对照,建立了米曲霉基因组的SYBR Green I应该定量PCR检测方法。结果显示,标准曲线的相关系数为0.998,最低可检测浓度为101copy/μL的阳性质粒,与其他的微生物的基因组不发生交叉反应,该技术可为检测烟叶霉变微生物提供快速可靠的检测手段。     

胶质芽孢杆菌葡萄糖磷酸变位酶基因的克隆、表达与酶学性质研究

胶质芽孢杆菌所产胞外多糖作为絮凝剂在食品工业废水处理方面比传统的工业絮凝剂具有更好应用效果而引起了广泛的关注。葡萄糖磷酸变位酶(PGM,EC5.4.2.2)能将葡萄糖-6-磷酸转变成葡萄糖-1-磷酸而被认为是多糖合成路径上的关键酶之一。本研究克隆获得来源于自胶质芽孢杆菌GIM1.16编码PGM的基因pgm。序列分析表明,该基因包含一个1710bp的读码框。在大肠杆菌中表达了pgm基因并纯化了重组蛋白,SDS-PAGE电泳结果显示重组的PGM分子量约为63kDa。重组的PGM最适反应温度为40℃,但当反应温度超过55℃时,PGM基本丧失活性,PGM在酸性(pH4~6)及碱性溶液(pH8.5~10)中均表现出低活性,其最适合反应pH值为7.5。PGM对底物葡萄糖-1-磷酸的Kcat和Km值分别为684min-1和0.24mM-1。本研究为胶质芽孢杆菌菌株的基因工程改造和代谢工程研究奠定了坚实基础。     

Lipozyme TL 100L的固定化及其催化甘油解制备甘油二酯的研究

利用4种常用大孔树脂(NKA-9,AB-8,D301R,D4020)对Lipozyme TL 100L进行固定化,并比较了固定化效果及4种固定化脂肪酶对甘油解反应制备甘油二酯的影响。结果表明:以弱极性大孔吸附树脂AB-8为载体固定化的Lipozyme TL 100L在无溶剂体系中催化大豆油甘油解反应制备甘油二酯的效率最高;当底物(精炼大豆油与甘油)摩尔比为1∶2,反应温度为50℃,AB-8大孔树脂固定化的Lipozyme TL 100L加酶量为600 U/g时,在甘油解反应6 h后产物中甘油二酯含量基本达到平衡,为54.39%,其中1,2-甘油二酯含量为33.87%,1,3-甘油二酯含量为20.52%。     

优化毕赤酵母X33重组表达球形马拉色菌脂肪酶LIP1

研究人工合成球形马拉色菌脂肪酶LIP1的基因,并成功在毕赤酵母X33中重组表达.利用响应面分析法,构建LIP1的酶活回归方程.由响应面分析,在温度27.0℃,pH值为7.69,酵母提取物浓度1.50％和葡萄糖浓度3.37％时,预测最大酶活为33U/mL.通过实验验证,最后结果为38U/mL.该值与模型预测基本一致.优化后的酶活提高了26.67％.通过响应面的条件优化,可以获得毕赤酵母X33重组表达LIP1的最大酶活.     

慕课结合翻转课堂的课程启发式教学探究

教学中对慕课与翻转课堂相结合的启发式教学方法的实施及成效进行了探究。以食品分析课程为例,采用线上慕课与线下翻转课堂相结合的教学模式,学生线上自主学习课程的核心知识点,预先掌握各种化学组分分析的多种分析方法,而在翻转课堂中,教师则以实际的化学分析案例启发学生运用线上慕课所掌握的化学分析方法解决实际组分分析问题。这种教学模式取得了良好的教学成效,提高了学生专业综合素质以及学以致用的能力。