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1.
建立一种快速测定水产食品中组胺的丹磺酰氯柱前衍生反相高效液相色谱方法。该方法中样品经三氯乙酸 提取、丹磺酰氯衍生,C18反相色谱柱分离,以70%乙腈和30%超纯水为流动相进行等度洗脱,254 nm波长处紫外检 测。结果显示,组胺保留时间为5.5 min,组胺在1~500 μg/mL范围内线性系数为0.999 9,仪器检出限(RSN=3)为 0.5 μg/mL,定量限(RSN=10)为1.0 μg/mL,且重复性良好;采用该方法测定了16 种水产品和19 种水产加工食品中 的组胺,结果显示含量在0~682.22 mg/kg之间;样品添加不同质量浓度组胺的回收率为89.54%~101.92%。结果表 明,该方法快速准确、灵敏度高、重复性好,适用于水产食品中组胺的测定。采用该方法检测了鲣鱼、鲭鱼和蓝圆 鲹在不同温度条件下的组胺变化情况,结果发现,3 种鱼在低温贮藏条件下的组胺含量明显低于高温贮藏条件下的 含量,表明低温贮藏可有效抑制组胺产生。  相似文献   
2.
杂色鲍组织蛋白酶L的分离纯化与性质研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
通过硫酸铵分级沉淀、SP-Sepharose阳离子交换层析、Sephacryl S-200HR凝胶过滤和Hydroxyapatite羟基磷灰石层析,从杂色鲍(Haliotis diversicolor)内脏中分离纯化了组织蛋白酶L。SDS-PAGE结果显示,纯化蛋白的分子量约为28ku。该酶最适温度37℃,最适pH5.5。当温度低于40℃,pH在5.0~6.5范围内该酶较稳定。底物特异性实验与抑制剂实验结果表明,该酶属于半胱氨酸蛋白酶。金属离子Mn2+、Ba2+和Mg2+对该酶有不同程度的激活作用,而Co2+、Cu2+、Zn2+、Fe2+和Ca2+等对该酶起抑制作用。  相似文献   
3.
鱼类死后肌肉容易发生软化现象。研究表明,这与肌肉中的丝氨酸蛋白酶有着密切的关系。本研究通过硫酸铵盐析、DEAE-Sephacel、Q-Sepharose及Capto Q等柱层析相结合的方法,从蓝圆鲹肌肉中纯化得到一种具有分解明胶能力的丝氨酸蛋白酶,SDS-PAGE结果显示其分子量约为60ku,该酶最适温度及最适pH分别为40℃和9.0。丝氨酸蛋白酶抑制剂Pefabloc SC、Benzamidine、MBTI、PMSF和LBTI均能明显的抑制该酶的活性,而其他蛋白酶抑制剂对其活性没有明显的影响。底物特异性表明其能有效的降解丝氨酸蛋白酶荧光底物Boc-Leu-Lys-Arg-MCA,但进一步研究发现,该酶对I型胶原蛋白及明胶有明显的分解能力,同时对肌球蛋白重链也有一定的分解作用,说明该酶可能参与鱼肉保鲜中肌肉软化的过程。  相似文献   
4.
九孔鲍鱼纤维素酶的分离纯化与性质分析   总被引:2,自引:0,他引:2  
采用SP-Sepharose阳离子葡聚糖凝胶交换柱层析、Sephacryl S-200丙烯葡聚糖凝胶柱层析和Hydrox-yapatite羟基磷灰石柱层析,从九孔鲍鱼(Haliotis diversicolor)消化腺中分离纯化到一种纤维素酶。SDS-PAGE结果显示,该酶的分子质量约为55kDa。该酶水解羧甲基纤维素钠的最适温度50℃,最适pH5.5。该酶在温度40℃以下,pH5.0~7.0之间具有较好的稳定性。  相似文献   
5.
在鱼糜制品生产过程中,凝胶劣化现象是引起鱼糜品质下降的重要原因。研究表明,溶酶体中的内源性组织蛋白酶B会促进肌原纤维蛋白的降解,进而导致鱼糜凝胶劣化。迄今为止,多种鱼体肌肉中的组织蛋白酶B已有研究,但海水经济低值鱼蓝圆鲹中该酶的情况却尚未报道。本研究采用硫酸铵沉淀和柱层析相结合的方法,从蓝圆鲹肌肉中分离纯化得到分子量约为27ku的组织蛋白酶B。酶学性质结果显示,该酶最适温度和最适pH分别为55℃和5.5,半胱氨酸蛋白酶抑制剂E-64能有效抑制其活性。对肌原纤维蛋白的降解实验表明,在最适条件下,蓝圆鲹组织蛋白酶B对肌原纤维蛋白有一定的降解作用。因此,组织蛋白酶B参与肌原纤维蛋白的降解,更可能参与在低pH条件下鱼糜凝胶劣化。  相似文献   
6.
以黄鳍鲷为研究对象,经过低温抽提、凝胶过滤等方法从黄鳍鲷肌肉中分离纯化到肌联蛋白(Titin)。免疫斑点印迹法(dot-blot)检测结果显示,纯化蛋白与小鼠抗鸡肌联蛋白单克隆抗体产生特异性反应。55℃条件下,以肌原纤维蛋白和纯化后肌联蛋白为底物进行分解结果显示,肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(MBSP)对肌联蛋白有明显的分解作用。  相似文献   
7.
为进一步认识蟹类的过敏原,采用免疫印迹方法,分析发现甲壳类过敏患者血清能与拟穴青蟹肌浆蛋白中分子质量约为21 kD的蛋白质产生特异的IgE结合反应,结果显示该蛋白可能是蟹类新型过敏原。通过硫酸铵盐析、阴离子交换和凝胶过滤柱层析等方法对21 kD-蛋白进行分离纯化,采用Western blotting和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization-time of flight-mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)确认纯化的21 kD-蛋白为肌质钙结合蛋白(sarcoplasmic calcium binding protein,SCP)。采用SMART-RACE(Switching Mechanism At RNA Termini-Rapid Amplification of cDNA Ends)的方法获得SCP的cDNA序列,该序列全长986 bp,开放阅读框为579 bp,编码193个氨基酸,其理论分子质量21.94 kD,等电点4.44。拟穴青蟹SCP与甲壳类动物SCP具有较高的同源性,与昆虫SCP的同源性较差;三级结构模拟分析显示,SCP含有5个螺旋-转角-螺旋结构区,即EF-手型结构区,并在其中两个手型结构区形成2个钙离子结合位点;进一步预测得到SCP的4个线性抗原表位和3个构象性抗原表位。  相似文献   
8.
水产品过敏原的研究现状和展望   总被引:3,自引:0,他引:3  
水产品作为人类食物的重要来源之一,其市场和消费群体不断扩大。与此同时,由水产品引发的食物过敏也日益增多,在联合国粮农组织公布的八大类过敏食物中,水产品就占了两大类。水产品过敏原有小清蛋白(Parvalbumin)、鱼卵蛋白(如鲑鱼的硫酸鱼精蛋白)和胶原蛋白(Collagen)、原肌球蛋白(Tropomyosin,TM)、精氨酸激酶(Arginine kinase)、肌球蛋白轻链(Myosin light chain)、肌钙结合蛋白(Sarcoplasmic calcium binding pro-tein)、血蓝蛋白亚基(Hemocyanin subunits)等。基于此,本文重点概述了国内外水产品过敏原及其加工脱敏技术的研究现状,以及今后水产品过敏原研究的发展趋势。  相似文献   
9.
在超声波处理对拟穴青蟹(Scylla paramamosain)过敏原(原肌球蛋白,Tropomyosin,TM)影响的研究基础上,本文采用超声波、微波、超声波结合蒸煮处理拟穴青蟹蟹肉,提取其蛋白粗提液,通过模拟胃肠液消化及SDS-PAGE电泳、Western-blotting、抑制性ELISA等方法分析TM的消化稳定性及过敏原性.结果显示,与未经处理的样品及非过敏蛋白相比,TM在超声波(200W,30℃)处理后降解较快;微波处理后TM的消化稳定性及过敏原性没有明显变化,超声波处理、超声波结合蒸煮处理后TM的消化稳定性及过敏原性明显降低.该结果提示,超声波、超声波结合蒸煮等加工处理方式可降低蟹肉的致敏性.  相似文献   
10.
鱼糜制品中大豆蛋白的过量添加已成为水产食品生产的一个新问题,建立有效的检测方法尤为重要.本研究通过丙酮浸泡、酸处理、硫酸铵盐析和柱层析等步骤分离纯化大豆胰蛋白酶抑制剂(Soybean trypsin inhibitor,STI)并制备抗STI单克隆抗体(A11-6).经过Protein G Sepharose柱层析分离得到高纯度的免疫球蛋白(IgG).采用SPDP(N-琥珀酰亚氨基-3-2-吡啶)和DTT(二硫苏糖醇)组合处理,成功将R-藻红蛋白偶联到抗STI单克隆抗体.利用该荧光标记的抗体建立的免疫荧光法能够检测出鱼糜制品中的STI,检测限为1.56μg/mL,灵敏度略高于传统的化学发光法.该免疫荧光法具有操作时间短、灵敏度高和使用安全等优点.  相似文献   
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