大肠杆菌肉碱脱水酶基因的克隆、测序及高效表达

［摘 要］目的 克隆并表达大肠杆菌肉碱脱水酶基因。方法 用聚合酶链反应（PCR）从大肠杆菌K12s中扩增大肠杆菌肉碱脱水酶基因caiB，测定其DNA序列，将caiB基因重组到T7启动子控制下的表达载体pET－28a（＋）中，构建表达质粒pETCaiB，转化大肠杆菌BL21（DE3），用1mmol/L异两基硫代-β-D半乳糖苷（IPTG）诱导表达。结果 克隆得到的肉碱脱水酶编码基因 caiB长度为 1221bp，与文献报道值相比,DNA序列有26个不同，氨基酸序列只有一个不同，即302位的丙氨酸变为苏氨酸。重组菌经IPTG诱导，可高效表达，SDS－PAGE分析表达蛋白相对分子质量约43000，表达产物含量占菌体总蛋白45％以上。结论 得到了高效表达肉碱脱水酶的重组菌，为制备L-肉碱创造了条件。     

葛枣猕猴桃果汁对氧自由基的清除作用

本文用几种方法在体外产生氧自由基，并测定其对人红细胞的氧化作用，同时以葛枣猕猴桃果汁为实验材料，研究了其果汁对氧自由基的清除作用。实验结果表明，：果汁能够降低氧自由基对红细胞的伤害；减少血红蛋白的氧化；抑制红细胞溶血及膜脂质过氧化作用。     

鹅红细胞Cu,Zn-SOD分离纯化及部分性质的研究

经氯仿-乙醇分级分离，丙酮沉淀及DE-32纤维素柱层析的方法，从鹅红细胞中得到纯化的Cu，Zn-SOD。结果表明此酶的比活力为10656．14U／mg，提纯倍数为354．73，聚丙烯酰胺凝胶电泳蛋白带与活性带相对应。相对分了量约为32000，相对亚基分子量约为16000。最大紫外吸收波长为258nm，列KCN和H202敏感，最适pH为6～9，热稳定性在60℃以下。     

SOD在啤酒中的抗氧化作用

众所周知，超氧化物歧化酶（简称SOD）广泛存在于各类生物体中，能对生物体内巾各种途径产生的有毒性的对细胞有很大破坏力的超氧自巾基（Q）进行歧化作用以解除其毒性‘，因此SOD被称为人体的“清道夫”．此外，SOD尚有抗氧化作用“，能除去诱发酯质过氧化作用的氧自巾基。SOD是一种纯天然生物制剂，无毒无副作用，使用方便，因此它是一种理想的抗氧剂。通过下述实验更说明了SOD加入啤酒中具有显著的抗氧化作用．1．实验部分1．1啤酒中已溶解氧的测定：测定试剂：SOD活力宝啤酒（铜陵啤酒厂生产，每瓶实测活性为380U／瓶）．测定仪…     

乌骨鸡红细胞超氧化物歧化酶的分离纯化及部分性质的研究

经氯仿-乙醇分级分离，丙酮沉淀及DE-32纤维素柱层析的方法，从乌骨鸡红细胞中得到纯化的Cu，Zn-SOD。结果表明此酶的比活力为11，954U／mg，提纯倍数为334．71，聚丙烯酰胺凝胶电泳蛋白带与活性带相对应。相对分子量约为32，000，相对亚基分子量约为16，000。最大紫外吸收波长为260nm，对KCN和H2O2敏感，最适pH为6～9，热稳定性在60℃以下。     

黄杆菌肝素酶Ⅱ的克隆与表达

目的克隆并表达黄杆菌肝素酶Ⅱ(HepⅡ)的基因。方法通过PCR从黄杆菌基因组DNA中扩增出黄杆菌HepⅡ的基因,经验证后插入到表达质粒pET-28a上构建表达载体,重组质粒转化E.coli BL21(DE3)进行蛋白质表达。结果成功地将PCR扩增得到的测序正确的HepⅡ基因构建入pET-28a载体上,重组质粒转入E.coli BL21(DE3)后表达产物经SDS-PAGE凝胶电泳鉴定得到目的蛋白,测活显示重组HepⅡ具有活性。结论克隆并成功表达了黄杆菌HepⅡ基因。     

海藻糖提高动物热耐受性的研究

目的：探讨海藻糖提高热耐受能力的作用，为研制耐热型保健饮料提供依据。方法：以小鼠为模型，考察不同成分饮用水（水、蔗糖和海藻糖）饲喂的小鼠热暴露的存活时间和衰竭游泳时间。并比较了高温适应前后以及高温处理前后小鼠的一些生理生化指标如体重、血清中钾离了浓度、血糖含量和血红蛋白含量。结果：海藻糖能显著延长小鼠的热暴露存活时间。生理生化指标表明海藻糖具有抗脱水，能够在高温环境中维持细胞中钾离子浓度，有效维持血红蛋白含量。并且有一定储能作用。结论：海藻糖可以提高动物热耐受性，很有希望成为一种耐热保健饮料的成分。     

重组人EC-SOD包涵体的稀释复性及重折叠后蛋白的纯化

目的确定重组人ECSOD包涵体体外稀释复性和复性后蛋白纯化的适宜方法。方法通过对pH、温度、包涵体蛋白浓度、尿素和精氨酸浓度及氧化还原对比率的定性定量分析,研究重组人ECSOD包涵体体外稀释复性的基本条件。采用金属离子亲和柱(IMAC)和肝素亲和柱(Heparinsepharose)对复性蛋白进行纯化,比较纯化效率的差异。结果最佳复性条件为pH8.5,尿素浓度为1.5molL,精氨酸浓度大于0.3molL,GSH∶GSSG=4∶1;复性温度及包涵体蛋白终浓度越高,复性效率越低。IMAC和Heparinsepharose亲和柱均可用来纯化复性蛋白溶液,但Heparinsepharose纯化效率较高。结论确定了重组人ECSOD包涵体体外稀释复性的最佳条件及复性后蛋白纯化的方法。     

类SOD的鉴别及研究进展

本文综述了近年类SOD的研究进展,其内容主要包括类SOD的鉴别、抗氧酶和抗氧剂的抗氧化作用。类SOD的应用研究主要有抗肿瘤作用、免疫作用、抗辐射、抗衰老、抗疲劳等。     

一种新型凋亡素融合蛋白的克隆表达及活性测定

目的 克隆表达EC-SOD3-凋亡素融合蛋白,并检测其生物活性.方法 PCR扩增出apopfin序列,与表达载体EC-SOD3-Pet-28a连接后在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导,表达产物进行Ni2+-NTA纯化和MIT活性检测.结果 表达载体Pet-28a-EC-SOD3-apoptin经酶切鉴定和序列分析,证明质粒构建正确,转化E. Coli BL21(DE3)后,重组蛋白获得表达,Ni2+-NTA纯化后的凋亡素融合蛋白纯度达到85%以上,经噻唑蓝(MTT)法测定具有活性.结论 成功构建了表达载体Pet-28a-EC-SOD3-apopfin,并在大肠杆菌中表达了EC-SOD3-凋亡素融合蛋白,纯化的蛋白质具有诱导HeLa细胞凋亡的能力.