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研究建立了一种实时荧光单引物等温扩增(RF-SPIA)技术以检测牛乳中的金黄色葡萄球菌。针对金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶(nuc)基因设计引物,对金黄色葡萄球菌进行特异性检测。结果表明,6株金黄色葡萄球菌的检测结果为阳性,而其他17株非金黄色葡萄球菌的检测结果均为阴性。RF-SPIA检测金黄色葡萄球菌纯培养物的灵敏度为2.0×101 CFU/m L,检测人工污染牛乳的检出限为6.0×101 CFU/m L。该方法特异性强、灵敏度高,能够实现对金黄色葡萄球菌的实时、快速检测,为金黄色葡萄球菌的检测提供了一条新途径。 相似文献
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五重PCR检测转基因大豆 总被引:4,自引:0,他引:4
旨在建立一套准确、快速、可靠的用于转基因大豆检测及DNA提取方法;以35S启动予(Cauliflowermosaicvirus 35S, CaMV 35S)、Nos终止子(Nopalinesynthase, Nos)、NPTⅡ、CP4-EPSPS四种外源基因和大豆内源基因(Lectin)为检测的目的片段,建立五重PCR反应体系,并采用改进的方法提取DNA,进行PCR扩增,实际检测了已知转基因大豆和市售大豆;改进的DNA提取方法与经典的CTAB方法相比,提取时间至少缩短了1h,降低了提取成本.经过PCR扩增对五种外源基因进行了检测,经DNA测序证实了产物为目的扩增产物.转基因大豆的检出限为0.2%~0.5%.改进后的DNA提取方法能够快速提取用于PCR扩增的高质量模板,消除了PCR反应的抑制因子;建立的五重PCR反应体系能够高效、准确的检测转基因大豆. 相似文献
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研究纤维素酶高产菌株康氏木霉原生质体制备及再生的适宜条件,为该菌细胞融合和诱变育种提供适宜的真菌状态。对影响原生质体形成和再生的各因素(菌龄、蜗牛酶浓度、酶解温度和时间、渗透压稳定剂的成分和浓度)进行试验比较。康氏木霉原生质体制备的最佳条件:菌龄22h,蜗牛酶浓度2.0%,酶解温度30℃,酶解时间2.5h,蜗牛酶溶液中的渗透压稳定剂为0.6mol/L NaCl,再生培养基中的渗透压稳定剂为0.8 mol/L蔗糖。可以获得细胞融合和细胞突变诱导所需的原生质体数量。并观察到原生质体的释放方式主要有2种:顶端释放和段端位释放;以一种方式进行再生。 相似文献